Page 64 - 《精细化工》2022年第5期

·918· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷

2.2 混合菌的构建
不同体积比混合菌对 3,4-DCA 的转化能力如图 4
所示。在相同培养条件下，当菌株 L13 与 P11-1 体
积比为 1∶1 时，混合菌群对 3,4-DCA 转化率最高，
达到 73.33%。同时，该混合菌群对 3,4-DCA 的转化
率较单一菌株 L13（1∶0）和 P11-1（0∶1）的转化
率分别提高 13.33%和 29.95%，效果显著。混合菌

的生长曲线及转化曲线如图 5 所示。菌株大量生长
图 2 P11-1（a）与 L13（b）菌落形态 和对底物的转化主要发生在前 3 d，后趋于稳定。
Fig. 2 Colony morphology of P11-1 (a) and L13 (b)

图 3 菌株 P11-1、L13 的系统进化树
Fig. 3 Phylogenetic tree of strain P11-1 and L13

图 4 不同接种比例混合菌对 3,4-DCA 的转化能力 图 5 混合菌的生长曲线及 3,4-DCA 转化率曲线
Fig. 4 Transformation ability of 3,4-DCA by mixed Fig. 5 Growth curve of mixed bacteria and transformation rate
bacteria with different inoculation proportions curve of 3,4-DCA

2.3 3,4-DCA 转化条件的优化 结果见表 3。根据分析结果，最佳条件组合为：摇
根据 1.6.4 节单因素预实验结果，当接菌量从 床转速 190 r/min，温度 30 ℃，pH 8.0，在此条件
1%提高到 3%时，3,4-DCA 转化率从 64.91%增加到 下 3,4-DCA 转化率为 89.26%。R pH >R 转速>R 温度，表明 pH
81.62%；当接菌量进一步提高时，转化率几乎不变； 对混合菌转化率影响最大，摇床转速其次，温度影
故确定最佳接种量为3%，不再纳入正交实验考察因素。 响最小。提高摇床转速，则氧气的转移速率增加，
3,4-DCA 转化率最高的其他条件分别为：温度 30 ℃、 从而促进混合菌对底物的利用 [11] ；pH 和温度过高或
pH 8、摇床转速 200 r/min。据此确定正交实验范围： 过低都可能影响相应酶的活性。
温度 28~32 ℃、pH 7~9、摇床转速 190~210 r/min。 方差分析（表 3）表明，3 个因素对转化率均有
正交实验设计及结果如表 2 所示，方差分析 显著影响（P<0.05），其中 pH 的 F 值最大，说明其