Page 155 - 《精细化工）》2023年第10期
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第 10 期 张心驰，等: 梯度醇沉兰州百合多糖结构及降血糖活性分析 ·2233·
酸氢二钠（质量分数 99%）、磷酸二氢钠（质量分数 4.0、5.0、6.0 mL 于 10 mL 容量瓶中并用胶头滴管
99%）、盐酸羟胺（质量分数 98.5%），分析纯，西 加蒸馏水定容至刻度，配制成质量浓度为 0、0.1、0.2、
安化学试剂厂；无水碳酸钠（Na 2 CO 3 ，质量分数 0.3、0.4、0.5、0.6 g/L 的溶液。再移取上述溶液各 1
99.8%），分析纯，天津市北辰方正试剂厂；吡啶（质 mL，分别加入苯酚溶液（质量分数为 5%）1 mL，
量分数 99.5%）、十水合四硼酸钠（质量分数 99.5%）， 摇匀、迅速加入硫酸（质量分数 95%~98%）5 mL，
分析纯，西陇化工股份有限公司；乙酸酐（质量分 混合均匀后，50 ℃水浴 10 min，取出后迅速放入
数 97%）、咔唑，分析纯，天津市化学试剂三厂；苯 25 ℃冷水中冷却至室温，在波长 490 nm 处用紫外-
酚、无水乙醇（体积分数 99.7%），分析纯，烟台市双 可见分光光度计检测吸光度。以吸光度（Y）为纵坐
双化工有限公司；三氟乙酸，分析纯，上海科丰实业 标，标准品质量浓度（X）为横坐标绘制葡萄糖标准
有限公司；牛血清蛋白，生物试剂，博飞美科公司。 曲线，得出回归方程为 Y=11.165X+0.1082，相关系
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DF-101S 集热式磁力加热搅拌器、DZF-6050 电 数 R =0.9906。
热真空干燥箱、RE-2000A 型旋转蒸发仪、DF-101S 1.2.2.2 兰州百合多糖 BLP-30、BLP-50、BLP-70、
恒 温水浴 锅， 上海耀 特仪 器设备 有限 公司 ； BLP-80 中多糖质量分数测定
SCIENTZ-10N 冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份 精密称取兰州百合多糖 BLP-30、BLP-50、
有限公司；AnkeGL-16G-II 高速冷冻离心机，上海 BLP-70、BLP-80 各10 mg，分别用蒸馏水定容于 10 mL
安亭科学仪器有限公司； UV-2800A 型紫外-可见分 容量瓶中，配制成质量浓度为 1 g/L 的溶液，备用。
光光度计，尤尼柯（上海）仪器有限公司；H1650-W 吸取 0.1 mL 各样品溶液于具塞试管中，加蒸馏水稀
医用离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司； 释至 1 mL，按照 1.2.2.1 节方法在波长 490 nm 处用
6890N 气相色谱仪、1260 高效液相色谱仪，安捷伦 紫外-可见分光光度计检测吸光度。根据葡萄糖标准
科技（中国）有限公司。 曲线计算样品中多糖质量分数。
1.2 方法 1.2.3 蛋白质量分数的测定
1.2.1 兰州百合多糖 BLP-30、BLP-50、BLP-70、 1.2.3.1 牛血清蛋白标准曲线的制作
BLP-80 的制备 精密称取牛血清蛋白标准品 25 mg 于 25 mL 容
称取兰州百合用清水洗净，置于托盘中，放入 量瓶中加蒸馏水定容至刻度，配制成质量浓度为 1
恒温干燥箱 50 ℃烘干，干燥后兰州百合粉碎过筛 g/L 的标准溶液，从标准液中分别吸取 0、1.0、2.0、
（40 目）。将过筛后的兰州百合干粉用体积分数 80% 3.0、4.0、5.0、6.0 mL 于 10 mL 容量瓶中并加蒸馏
乙醇进行回流脱脂，过滤后收集残留物，在 50 ℃下风 水定容至刻度，配制成质量浓度为 0、0.1、0.2、0.3、
干 48 h。将残留物在料液比 1∶20（g∶mL）、90 ℃ 0.4、0.5、0.6 g/L 的溶液。再移取上述溶液各 1 mL，
的条件下加入蒸馏水提取 2 次（2 h/次） ，用纱布过 分别加入考马斯亮蓝 G-250（质量分数为 0.01%）溶
滤，收集滤液置入 80 ℃恒温干燥箱中浓缩至原体 液 5 mL，混合均匀室温放置 5 min，在波长 595 nm
积的 1/3，在浓缩液中加入无水乙醇至浓缩液中乙醇 处用紫外-分光光度计检测吸光度。以吸光度（Y 1 ）
体积分数为 30%，于 4 ℃冰箱中醇沉 24 h，离心 为纵坐标，标准品质量浓度（X 1 ）为横坐标绘制牛
（3000 r/min，5 min）将上清液与沉淀分开，收集 血清蛋白标准曲线，得出回归方程为 Y 1 =6.6619X 1 +
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沉淀获得兰州百合多糖 30%（乙醇体积分数）醇沉 0.0016，相关系数 R 1 =0.9949。
组分，记为 BLP-30。在上述上清液中继续加入无水 1.2.3.2 兰州百合多糖 BLP-30、BLP-50、BLP-70、
乙醇至上清液乙醇体积分数为 50%，于 4 ℃冰箱中 BLP-80 中蛋白质量分数测定
醇沉 24 h，离心（3000 r/min，5 min）分离上清液 吸取 0.1 mL 1.2.2.2 节配制好各样品溶液于具塞
和沉淀，收集沉淀获得兰州百合多糖 50%（乙醇体 试管中，加蒸馏水稀释至 1 mL，按照 1.2.3.1 节方
积分数）醇沉组分，记为 BLP-50。按照上述方法， 法在波长 595 nm 处用紫外-分光光度计检测吸光度。
依次得到乙醇体积分数为 70%（记为 BLP-70）、80% 根据标准曲线计算样品中蛋白质量分数。
（记为 BLP-80）醇沉组分，所得沉淀冷冻干燥（–80 ℃， 1.2.4 糖醛酸质量分数的测定
1 Pa，48 h）备用。 1.2.4.1 糖醛酸标准曲线的制作
1.2.2 可溶性总糖质量分数的测定 精密称取乳糖醛酸标准品 25 mg 于 25 mL 容量
1.2.2.1 葡萄糖标准曲线的制作 瓶中加入蒸馏水定容，配制成 1 g/L 的标准溶液。
精密称取葡萄糖标准品 25 mg 于 25 mL 容量瓶 从标准液中分别吸取 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、
中加蒸馏水定容至刻度，配制成质量浓度为 1 g/L 6.0 mL 于 10 mL 容量瓶中加蒸馏水定容至刻度，配
的标准溶液，从标准液中分别吸取 0、1.0、2.0、3.0、 制成质量浓度为 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 g/L
