Page 156 - 《精细化工）》2023年第10期
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·2234·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 40 卷

            的溶液。再移取上述溶液各 1 mL，在冰水浴中加入                          1.2.7   相对分子质量测定
            十水合四硼酸钠硫酸溶液（质量分数为 0.478%）6                             右旋糖酐对照品溶液的制备：称取不同相对分
            mL，混合均匀后，放入沸水浴 20 min，取出后迅速                        子质量（180、2700、5250、9750、13050、36800、
            放入 25  ℃水中冷却至室温后加入 0.2 mL 咔唑乙醇                     64650、135350）的右旋糖酐对照品，用蒸馏水配制
            溶液（质量分数为 1.25%），混合均匀后放置 2 h，                       成质量浓度为 1 g/L 对照品溶液，经 0.45 μm 水相微
            用紫外-分光光度计在波长 530 nm 处检测吸光度。                        孔滤膜过滤后进样，记录各对照品的保留时间，以
            以吸光度（Y 2 ）为纵坐标，标准品质量浓度（X 2 ）                       保留时间为横坐标，相对分子质量对数为纵坐标，
            为 横坐标绘 制标准曲 线，得出 回归方程 为                            绘 制右旋糖 酐标准曲 线，得出 回归方程 为
                                           2
                                                                                             2
            Y 2 =13.874X 2 – 0.0015，相关系数 R 2 =0.996。           Y 3 =–0.3967X 3 +11.134，相关系数 R 3 =0.9901。
            1.2.4.2   兰州百合多糖 BLP-30、BLP-50、BLP-70、                 兰州百合多糖 BLP-30、BLP-50、BLP-70、
            BLP-80 中糖醛酸质量分数测定                                  BLP-80 中相对分子质量的测定：将多糖样品用蒸馏
                 吸取 0.2 mL 1.2.2.2 节配制好的各样品溶液于具                水各配制成质量浓度为 1 g/L 的溶液，0.45 μm 滤膜
            塞试管中，加蒸馏水稀释至 1 mL，按照 1.2.4.1 节                     过滤后进样，分别记录各样品的图谱及保留时间，根
            方法用紫外-分光光度计在波长 530 nm 处检测吸光                        据右旋糖酐标准曲线计算样品中多糖相对分子质量。
            度。根据标准曲线计算样品中糖醛酸质量分数。                                  色谱条件：仪器为 HPLC-RID 检测器；色谱柱
            1.2.5   紫外光谱分析                                     为 TSKgel G2500（7.8 mm× 30 cm×10 μm）与 3000
                 用蒸馏水配制质量浓度为 1 g/L 的兰州百合多                      PWXL（7.8 mm×30  cm×10  μm）串联；同型保护柱
            糖溶液，用紫外-可见分光光度计在 190~900 nm 范                      TSKgel guardcolumn PWXL      （6.0 mm×4 cm）；流
            围内对兰州百合多糖各醇沉组分进行扫描分析。                              动相：超纯水，等度洗脱；流速：0.8 mL/min；示差检
            1.2.6   单糖组成分析                                     测器温度：40  ℃，进样量：10 μL。
                 自然界中存在的多糖大部分为杂多糖，由多种                          1.2.8   体外降血糖活性测定
            单糖聚合而成。单糖组成对多糖生物活性具有重要                                 磷酸盐缓冲液（PBS）配制：将 45 mL 磷酸二
            影响，单糖组成是评价多糖理化性质的第一步，也                             氢钠水溶液（0.1 mol/L）和 55 mL 磷酸氢二钠水溶
            是糖类结构研究中必不可少的一个环节                   [14] 。由于单      液（0.1 mol/L）充分混匀，转移至 200 mL 定容瓶中，
            糖具有非挥发性、热稳定性，因此气相色谱法检测                             加入蒸馏水定容至刻度，即得 PBS（pH 6.8，0.1 mol/L）。
            前需要衍生化，常通过衍生化来提高糖类物质的挥                             1.2.8.1   兰州百合多糖 BLP-30、BLP-50、BLP-70、
            发性以及挥发后的稳定性，减少糖异构化造成的多                             BLP-80 对 α-淀粉酶活性抑制实验
            峰现象，有利于对单糖进行准确分析                  [15] 。称取各组           将 BLP-30、BLP-50、BLP-70、BLP-80 溶解在
            分多糖样品 10 mg，分别溶于 4 mL 三氟乙酸水溶液                      蒸馏水中，分别制备成质量浓度为 4、2、1、0.5、
            （2 mol/L）中，在 110  ℃下水解 8 h 后转移至蒸发                  0.25、0.125、0.0625 g/L 的溶液。将 0.3 mL 不同质
            皿中加入甲醇（质量分数 99.5%）2 mL，将蒸发皿                        量浓度的多糖溶液移至试管中，加入 0.3 mL α-淀粉
            置于 80  ℃水浴锅上蒸发（重复加入甲醇至蒸发步                          酶溶液（10 U/mL）充分混匀，37  ℃水浴 5 min，
            骤 3 次，以除尽三氟乙酸），残渣中各加入 20 mg                        然后加入预热的 0.3 mL 质量分数 1%的淀粉溶液
            盐酸羟胺（质量分数 98.5%）、2 mL 吡啶（质量分                       （PBS 配制，pH 6.8，0.1 mol/L），37  ℃水浴 15 min，
            数 99.5%），90  ℃反应 0.5 h，放入 25  ℃水中冷却                最后加入 0.5 mL 3,5-二硝基水杨酸溶液（DNS，质
            至室温后各加入 2 mL 乙酸酐（质量分数 97%）于                        量分数 0.63%），沸水浴孵育 5 min。放入 25  ℃冷
            90  ℃继续反应 0.5 h，放入 25  ℃水中冷却至室温后                   水中冷却后，用蒸馏水将混合物稀释至 10 mL，用
            同时加入蒸馏水和氯仿各 1 mL 萃取 5 次，取氯仿层                       紫外-可见分光光度计在波长 540 nm 处检测吸光度，
            转移至蒸发皿，在恒温水浴锅中 80  ℃蒸干除去水                          以阿卡波糖作为阳性对照。按公式（1）计算 α-淀粉
            分，用氯仿定容至 500 μL 后进行 GC 检测。各标准                      酶抑制率：
            品衍生化方法同上。                                                                      A   A
                                                                                      
                                                                      -淀粉酶抑制率     / % 1    3   4   100    （1）
                 GC 条件：气相色谱仪，火焰离子化检测器                                                      A   A 2
                                                                                            1
            （FID），石英毛细管柱 DB-1（30 m×0.32 mm×                    式中：A 1 为蒸馏水（0.3 mL）+α-淀粉酶溶液（0.3 mL）+
            0.3 μm），进样口温度：250  ℃，检测器温度：260  ℃，                 淀粉溶液（0.3 mL）+DNS 溶液（0.5 mL）+蒸馏水
            程序升温以 3  ℃/min 的速率从 100  ℃（2 min）升                 稀释至 10 mL 于 540 nm 处所测得的吸光度；A 2 为
            温至 220  ℃（5 min）。分流比为 50∶1（单位为 μL）。                蒸馏水（0.3 mL）+PBS 溶液（0.3 mL）+淀粉溶液
            载气为 N 2 ，流速为 2 mL/min。                             （0.3 mL）+DNS 溶液（0.5 mL）+蒸馏水稀释至
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