Page 157 - 《精细化工）》2023年第10期

第 10 期 张心驰，等: 梯度醇沉兰州百合多糖结构及降血糖活性分析 ·2235·

10 mL 于 540 nm 处所测得的吸光度；A 3 为多糖溶液 相对分子质量较大的多糖先被沉淀出来，随着乙醇
（0.3 mL）+α-淀粉酶溶液（0.3 mL）+淀粉溶液 体积分数的增加，相对分子质量较小的多糖逐渐被沉
（0.3 mL）+DNS 溶液（0.5 mL）+蒸馏水稀释至 淀出来，因此 BLP-80 中多糖种类可能更多，多糖质量
10 mL 于 540 nm 处所测得的吸光度；A 4 为多糖溶液 分数更高 [16-17] ，这与刘贵阁等 [18] 研究结果基本一致。
（0.3 mL）+PBS 溶液（0.3 mL）+淀粉溶液（0.3 mL）+
DNS 溶液（0.5 mL）+蒸馏水稀释至 10 mL 于 540 nm 表 1 4 种多糖中可溶性总糖、蛋白、糖醛酸的质量分数
Table 1 Mass fractions of total soluble sugars, proteins
处所测得的吸光度。 and glyoxylates in four polysaccharides
1.2.8.2 兰州百合多糖 BLP-30、BLP-50、BLP-70、 可溶性总糖 蛋白质量 糖醛酸质量
样品
BLP-80 对 α-葡萄糖苷酶活性抑制实验 质量分数/% 分数/% 分数/%
分别用 PBS 溶液（pH 6.8，0.1 mol/L）配制对 BLP-30 30.31±6.01 a 1.77±0.61 a 2.09±0.49
a
b
硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（0.5 mmol/L，PNPG） BLP-50 15.77±2.35 b 3.49±0.49 ac 0.30±1.11
a
溶液、α-葡萄糖苷酶溶液（1 U/mL）和碳酸钠溶液 BLP-70 24.25±1.21 a 4.54±0.83 bc 1.91±0.07
b
（0.1 mol/L，Na 2 CO 3 ）。将 BLP-30、BLP-50、BLP-70、 BLP-80 30.96±3.62 a 6.41±2.12 b 0.92±0.53
BLP-80 溶解于蒸馏水中，分别制备成质量浓度 4、 注：不同小写字母表示不同多糖组分间质量分数具有显著
2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 g/L 的溶液。在试 差异（P<0.05）。

管中将不同质量浓度的 0.4 mL 多糖溶液和 0.4 mL
2.2 紫外-可见吸收光谱分析
的 α-葡萄糖苷酶溶液（1 U/mL）充分混合，然后在
4 种多糖紫外-可见吸收光谱见图 1。由图 1 可
37 ℃下避光孵育 10 min。随后，加入 0.2 mL 的
知，4 种多糖在 200 nm 处均具有多糖的典型特征吸
PNPG 溶液（0.5 mmol/L）并在 37 ℃的黑暗中孵育
收 [16] ，且在 260 nm 糖醛酸特征峰和 280 nm 蛋白特
20 min。最后，向混合物中加入 4 mL 的 Na 2 CO 3 溶
征峰处均无吸收峰，表明 4 种多糖均不含或含有极
液（0.1 mol/L）终止反应，用紫外-可见分光光度计
少量糖醛酸和蛋白质 [19] ，这与表 1 的结果基本一致。
在波长 400 nm 处检测吸光度，以阿卡波糖为阳性对
可见 4 种多糖中杂质较少，有利于下一步结构的鉴
照。按公式（2）计算 α-葡萄糖苷酶抑制率。
1(A  A  ) 定分析。
 -葡萄糖苷酶抑制率 / %  1 2  100 （2）
A 0
式中：A 0 为 PBS 溶液于 400 nm 处所测得的吸光度；
A 为多糖溶液 （ 0.4 mL ） +α- 葡萄糖苷酶溶液
1
（0.4 mL）+PNPG 溶液（0.2 mL）+Na 2 CO 3 溶液
（4 mL）于 400 nm 处所测得的吸光度； A 为多糖
2
溶液（0.4 mL）+PBS 溶液（0.4 mL）+PNPG 溶液
（0.2 mL）+Na 2 CO 3 溶液（4 mL）于 400 nm 处所测
得的吸光度。

2 结果与讨论
图 1 4 种多糖 UV-Vis 谱图
2.1 化学成分分析 Fig. 1 UV-Vis adsorption spectra of four polysaccharides
经不同浓度乙醇分级醇沉得到 4 种兰州百合多
糖 BLP-30、BLP-50、BLP-70 和 BLP-80，分别测定 2.3 单糖组成分析
各多糖中的可溶性总糖、蛋白、糖醛酸质量分数， 4 种多糖的气相色谱图见图 2，4 种多糖摩尔分
结果如表 1 所示。由表 1 可知，BLP-80 和 BLP-30 数见表 2。由图 2 和表 2 可知，兰州百合多糖主要由
可溶性总糖质量分数较高，且 BLP-80 最高，为 甘露糖、葡萄糖和少量半乳糖组成，BLP-30 和 BLP-50
30.96%，而 BLP-50 可溶性总糖质量分数最低，为 为葡聚糖，BLP-30 中甘露糖、葡萄糖、半乳糖摩尔分
15.77%，说明一定条件的梯度醇沉能够起到进一步 数分别为 10.18%、88.67%、1.15%；BLP-50 中甘露糖、
纯化多糖，提高可溶性总糖质量分数的作用。4 种多 葡萄糖、半乳糖摩尔分数分别为 2.49%、97.02%、
糖的蛋白质量分数随乙醇体积分数的增加而逐渐增 0.49%；BLP-70 为半乳甘露葡聚糖，BLP-70 中甘露
加，但无显著性差异，蛋白质量分数范围在 1%~7% 糖、葡萄糖、半乳糖摩尔分数分别为 26.94%、
之间，糖醛酸质量分数范围在 0.30%~2.10%之间， 68.21%、4.85%；BLP-80 为甘露葡聚糖，BLP-80 中
差异不显著。这可能是由于当乙醇体积分数较低时， 甘露糖和葡萄糖摩尔分数分别为 41.56%和 58.44%，