Page 137 - 《精细化工》2023年第11期

第 11 期 高亚惠，等: 芽孢杆菌 ZYCHH-01 发酵液提取物的抗菌抗氧化性能评价及应用 ·2449·

（1）动物脱毛 2.2 提取物的抑菌活性分析
实验动物应在饲养条件下检疫和适应环境至少 为了验证该提取物抗菌活性，对 6 种生活中常见
5 d。实验过程中严格遵守《实验动物管理条例》和 的致病菌（E. coli、S. aureus、L. monocytogenes、Shigella、
《实验动物 福利伦理审查指南》（GB/T 35892— P. aeruginosa、S. typhimurium）进行抗菌活性测试，并
2018） [32] 中的要求，符合动物实验伦理要求。实验 测量抑菌圈直径，结果如图 1 和表 3 所示。
开始前 24 h，对小鼠背部脊柱两侧进行脱毛，注意
不得损伤皮肤，脱毛范围每块约为 3 cm×3 cm，选
择健康无损的皮区进行实验。
（2）染毒方法
取 0.5 mL 添加提取物的面霜到 2.5 cm×2.5 cm
纱布贴片作为处理贴片，而另一贴片用 0.5 mL 蒸馏
水作为对照贴片，将两个贴片轻轻贴到每只小鼠选
定的脱毛皮肤部位，用无刺激性胶布和绷带进行固
定，用弹力布包裹小鼠的整个躯干 4 h 以防贴片脱
位。在去除贴片后 72 h 观察皮肤情况，并记录反应
过程中损伤和其他毒性作用 [33] 。

A~F 分别对应 E. coli、S. aureus、Shigella、L. monocytogenes、
2 结果与讨论 P. aeruginosa、S. typhimurium
图 1 提取物对指示菌的抗菌效果
2.1 提取物的成分分析 Fig. 1 Antibacterial effect of extract on indicator bacteria
用 GC-MS 对提取物的成分进行分析，共检测
出 60 余种生物活性化合物，用峰面积归一化法计算 表 3 芽孢杆菌 ZYCHH-01 发酵液提取物对指示细菌的
主要化合物的相对含量，结果见表 2。提取物主要 抗菌活性
成分为亚油酸、N-棕榈酸、亚麻酰氯、环丙辛酸、 Table 3 Antibacterial activity of Bacillus ZYCHH-01
fermentation broth extract against indicator
硬脂酸、芥酸酰胺、环二肽、油酸酰胺。其中，亚 bacteria
油酸含量最高，占提取物总质量的 29.07%；其次为 抑菌圈直径/mm
N-棕榈酸、亚麻酰氯、环丙辛酸和环二肽，分别占 指示菌 提取物 A 生理盐水
+
提取物总质量的 6.31%、4.21%、3.78%和 3.71%。 E. coli 20.85±0.23 18.84±0.39 0
这些主要化合物中含有不饱和键、酸类、肽类等， S. aureus 18.64±0.23 9.11±0.07 0
具有抗菌、抗氧化、抗炎特性，因此，需进一步对 Shigella 27.34±0.19 19.85±0.37 0
提取物的抗菌抗氧化活性进行研究。 L. monocytogenes 21.17±0.19 11.44±0.51 0
P. aeruginosa 17.24±0.35 11.86±0.39 0
表 2 芽孢杆菌 ZYCHH-01 发酵液提取物 GC-MS 分析 S. typhimurium 22.21±0.58 27.31±1.38 0
Table 2 GC-MS analysis of Bacillus ZYCHH-01 fermentation
broth extract
提取物对 6 种指示菌均有不同程度的抑制作
序号 保留时间/min 分子式 相对含量/% 检出化合物
用。抑菌圈直径＜10 mm 为具有弱抗菌活性；抑菌
1 22.147 C 18H 32O 2 29.07 亚油酸
圈直径在 10~16 mm 为具有中等抗菌活性；抑菌圈
2 20.321 C 16H 32O 2 6.31 N-棕榈酸 [34]
直径＞16 mm 为具有强抗菌活性 。由图 1 可见，
3 25.061 C 18H 31ClO 4.21 亚麻酰氯
6 种指示菌的培养基都有抑菌圈出现，且抑菌圈明
4 24.103 C 22H 38O 2 3.78 环丙辛酸
显，说明该提取物对 6 种指示菌株都表现出显著的
5 22.328 C 18H 36O 2 3.02 硬脂酸
抑制作用。从表 3 可以看出，该提取物对 Shigella
6 27.509 C 22H 43NO 2.70 芥酸酰胺
抑菌效果最好，抑菌圈直径为（27.34±0.19）mm，对
7 20.179 C 12H 22N 2O 2 2.54 环 (亮氨 酸 -亮 S. typhimurium 和 L. monocytogenes 的抑菌效果次之，
氨酸)二肽
抑菌圈直径为（22.21±0.58）mm 和（21.17±0.19）mm，
8 22.514 C 18H 35NO 2.27 油酸酰胺
对 P. aeruginosa 抗菌潜力最弱，但仍保持较高的抑
9 18.111 C 15H 30O 2 1.17 环 (脯氨 酸 -甘
氨酸)二肽 菌活性，抑菌圈直径为（17.24±0.35）mm。其中，

注：通过峰面积归一化法计算各成分的相对含量。 该提取物对 E. coli、S. aureus、L. monocytogenes、