Page 155 - 《精细化工》2023年第11期

第 11 期 石婷婷，等: 磁性磷脂酶 D 交联酶聚集体的制备及其酶学性质 ·2467·

从而导致固定化后 scPLD 的活性降低。因此，选择 0.01%的戊二醛作为交联剂交联 80 min。
m(Fe 3 O 4 )∶m(scPLD)= 5∶1 来固定化 scPLD。

图 2 Fe 3 O 4 载体与 scPLD 质量比对固定化 scPLD 酶活回
收率和蛋白回收率的影响
Fig. 2 Effects of mass ratio of Fe 3 O 4 carrier to scPLD on
enzyme activity recovery and protein recovery of
immobilized scPLD

2.1.4 戊二醛浓度对固定化 scPLD 酶活回收率和蛋
白回收率的影响
按照 1.4.5 节研究不同体积分数的戊二醛对固
图 3 戊二醛体积分数（A）和交联时间（B）对固定化
定化 scPLD 酶活回收率和蛋白回收率的影响，结果
scPLD 酶活回收率和蛋白回收率的影响
见图 3A。如图 3A 所示，随着戊二醛体积分数的增 Fig. 3 Effects of glutaraldehyde volume fraction (A) and
加，蛋白回收率和固定化酶活都呈先上升后下降的 cross-linking time (B) on enzyme activity recovery
趋势。这可能是由于低体积分数的戊二醛不能交联 and protein recovery of immobilized scPLD
固定所有蛋白，而过高体积分数的戊二醛会改变酶
的四级结构 [14] ，影响酶活。此外，也有研究表明， 2.2 MCLEA 的性质研究
2.2.1 MCLEA 的表征
戊二醛是一种酶蛋白失活剂，它可以渗透到蛋白活
Fe 3 O 4 载体和 MCLEA 的 FTIR 谱图见图 4A。
性位点，与必需氨基酸残基发生催化反应，最终导 由于==CH 键、C—O—C 键、O==C—NH 肽键、
致酶活性损失 [15] 。因此，确定交联剂戊二醛最佳体
NH 和 OH 键的存在，这些键的 FTIR 谱图分别会在
积分数为 0.01%。
500~700、1050、1630、3000~3800 cm –1 处出现吸
2.1.5 交联时间对固定化 scPLD 酶活回收率和蛋白
收峰。通过比较 MCLEA 和 Fe 3 O 4 的 FTIR 谱图发
回收率的影响
现，MCLEA 在 500~700、1050、1630、3000~3800
戊二醛作为一种酶蛋白失活剂，它可以使酶活
–1
cm 处的吸收峰波数都比 Fe 3 O 4 大（Fe 3 O 4 载体在
性受到损害，在确定了戊二醛体积分数为 0.01%后，
1630 cm –1 处的微弱吸收可能是制备过程中的微量
按照 1.4.6 节实验方法考察了交联时间对固定化 scPLD
蛋白污染造成），说明 scPLD 成功与 Fe 3 O 4 结合，
酶活回收率和蛋白回收率的影响，结果见图 3B。如图
制得了 MCLEA。
3B 所示，酶活回收率随交联时间的增加而先增加，

在交联时间达到 80 min 时，固定化酶活达到最大，
为（437.00±6.60）U/g，此时，酶活回收率达到
72.89%，继续增加交联时间，酶活回收率骤然下降。
另外，蛋白回收率则随着交联时间增加而增加，在
80 min 时蛋白几乎完全被交联固定。因此，选择最
佳交联时间为 80 min。
通过上述条件优化，确定了制备 MCLEA 过程
中的最优条件为：选择体积分数为 80%的异丙醇作
为沉淀剂，m(Fe 3 O 4 )∶m(scPLD)=5∶1，体积分数为