Page 73 - 《精细化工》2023年第2期
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第 2 期 陈浩莹，等: 碱提白芨粗多糖脱蛋白方法比较及抗氧化活性 ·295·
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出 BSP 的典型结构特征。3346 和 2927 cm 处的吸 由图 5 可知，未进行脱蛋白处理的 BSP-A 对
收峰分别为 O—H 和 C—H 键的拉伸振动 [29] 。 ABTS•的 IC 50 为 4.236 g/L，ORAC 值为 13.24 μmol
1480~1350 cm –1 处的吸收峰为—CH(O—CH 2 )单键 TE/g，体现了 BSP-A 样品优良的抗氧化活性。与未
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弯曲振动 [30] ，而 1151 和 1060 cm 处的吸收峰为吡 进行脱蛋白处理的 BSP-A 相比，经过脱蛋白处理的
喃糖中的 C—O—C 键不对称拉伸振动。在 900~ BSP-A 样品抗氧化活性均有一定的下降，主要是因
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800 cm 的范围内观察到的小峰意味着 α-构型和 β- 为在多糖的纯化过程中，非多糖的抗氧化物质如多
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构型的存在 [31] ，812 和 876 cm 处的吸收峰分别为 肽、多酚和黄酮等可能被除去，使抗氧化活性降低。
D-甘露糖和 D-葡萄糖残基 [4,32] 。经 TCA 法和 TCA+ 但多糖本身纯度的提高，也有利于基团的暴露，促
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正丁醇法处理的样品在 616 cm 处都出现了明显的 进电子和氢原子的转移。从图 5 可知，TCA+正丁醇
吸收峰，归属于 C—Cl 键的伸缩振动，表明 TCA 可 法对 BSP-A 的 ABTS•抑制活性和氧自由基吸收能力
能残留在 BSP-A 样品中。结果表明，用不同脱蛋白 的影响比较大，IC 50 上升为 9.562 g/L，ORAC 值下降
方法对 BSP-A 进行处理对所得样品的特征峰型有一 为 7.23 μmol TE/g，这主要是因为多糖的损失以及单
定的影响，但 BSP 典型特征峰没有消失。 糖结构的变化，使 BSP-A 的抗氧化活性降低；木瓜
蛋白酶法和 Sevage 法则能较好地保留 BSP-A 的抗氧
化活性。
3 结论
通过水提醇沉法提取的 BSP-A 总糖质量分数达
到 94.86%±0.56%，蛋白质量分数为 1.91%±0.24%。
本文采用 6 种方法对 BSP-A 进行脱蛋白处理，其中，
Sevage 法、木瓜蛋白酶法和三相分离法对 BSP-A 的
回收率达到 84%以上，反应相对温和，BSP-A 的损
失较低；但蛋白脱除率都<32%；TCA+正丁醇法对
图 4 BSP-A 的 FTIR 谱图
Fig. 4 FTIR spectra of BSP-A BSP-A 的脱蛋白效果最佳，蛋白脱除率达到了
90.31%，但除了 BSP-A 回收率低，还改变了单糖组
2.5 脱蛋白方法对 BSP-A 体外抗氧化活性的影响
成、Zeta 电位和抗氧化活性等。木瓜蛋白酶法和
根据现有清除自由基的机理，体外抗氧化能力
Sevage 法则能较好地保留 BSP 的抗氧化活性。相对
是通过单电子转移（SET）或氢原子转移（HAT） 来说，Sevage 法是一种对 BSP-A 结构和活性保留
来测定的 [33] 。典型的涉及电子捐赠的抗氧化检测是
较好的脱蛋白方法，但脱蛋白效率不佳，这主要因
ABTS•抑制活性，而涉及 HAT 清除自由基的是
为本研究的碱提 BSP-A 中结合态蛋白较多。高效、
ORAC。不同脱蛋白方法对 BSP-A 体外抗氧化活性
环保且保护性强的新型脱蛋白方法仍然需要持续
的影响如图 5 所示。 研究。
参考文献：
[1] JIANG S, WANG M Y, JIANG L, et al. The medicinal uses of the
genus Bletilla in traditional Chinese medicine: A phytochemical and
pharmacological review[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2021,
280: 114263.
[2] LIU S, LYU D H, LU C, et al. Tulasnella can contribute to
breakthrough in germination of the medicinal orchid Bletilla striata
via producing plant hormones[J]. Rhizosphere, 2022, 22: 100527.
[3] MORITA H, KOYAMA K, SUGIMOTO Y, et al. Antimitotic activity
and reversal of breast cancer resistance protein-mediated drug
resistance by stilbenoids from Bletilla striata[J]. Bioorganic &
Medicinal Chemistry Letters, 2005, 15(4): 1051-1054.
[4] ZHANG C, GAO F, GAN S, et al. Chemical characterization and
gastroprotective effect of an isolated polysaccharide fraction from
Bletilla striata against ethanol-induced acute gastric ulcer[J]. Food
图 5 不同脱蛋白方法对 BSP-A 体外抗氧化活性的影响 and Chemical Toxicology, 2019, 131: 110539.
Fig. 5 Effect of deproteinization methods on in vitro antioxidant [5] WANG W, MENG H. Cytotoxic, anti-inflammatory and hemostatic
activity of BSP-A spirostane-steroidal saponins from the ethanol extract of the roots of
