Page 110 - 《精细化工》2023年第5期
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·1030·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 40 卷

                 随着生活水平的提高，中国的化妆品市场迎来                          MICROCL 17 小型高速台式离心机、Nicolet iS50 傅
            了蓬勃发展，越来越多的消费者开始关注化妆品的                             里叶变换红外光谱仪，美国赛默飞世尔科技有限公
            质量安全。性激素是一种甾体激素，包括孕激素、                             司；FRQ-1006T 数显超声波清洗器，杭州法兰特超
            雌激素和雄激素。性激素基本结构中含有环戊烷多                             声波科技有限公司；JEM-2100 plus 透射电子显微
            氢菲的骨架，不同甾体激素的结构只能通过其基环                             镜，日本电子株式会社；UV-3600 plus 紫外-可见分
                                            [1]
            上附着官能团的位置和类型来区分 。性激素是一                             光光度计，日本岛津公司；FS5 荧光光谱仪，英国
            种特殊的化学信使，负责维持体内环境、生殖、代                             爱丁堡仪器公司。
                        [2]
            谢和免疫功能 。当其直接作用于皮肤时，虽然短期                            1.2   制备
            内具有消除皮肤皱纹、增强皮肤弹性、预防皮肤老化                            1.2.1   β-CD@AuNPs 的制备
            等作用，但长期使用会导致黑斑、皮肤萎缩、代谢功                                在材料制备之前，需要将所有实验所需的玻璃
                                                        [3]
            能紊乱及身体发育异常等副作用，甚至具有致癌性 。                           仪器在王水中浸泡 1 d，然后用超纯水冲洗并在烘箱
            中国《化妆品安全技术规范》（2015 年版）和 2000                       中 60  ℃干燥 1 d 后使用。β-CD@AuNPs 的制备参
            年欧盟化妆品法规（Council Directive 76/768/EEC）             考文献[17]的方法并稍做改进。将 45 mL 去离子水、
                                                [4]
            均明确规定性激素为化妆品中禁用物质 。                                5 mL 磷酸盐缓冲液（PBS，0.1 mol/L, pH 7.0）、400 μL
                 目前，对化妆品中性激素的检测主要采用仪器                          氯金酸水溶液（质量分数 1%）和 0.1134 g β-CD 固
            分析方法，例如：高效液相色谱法                 [5-7] 、液相色谱-       体加入到圆底烧瓶中，搅拌至溶解，溶液由淡黄色变
            质谱法    [8-9] 、气相色谱-质谱法     [10] 等。尽管这些基于           为无色；然后，将混合物加热至沸腾，并回流 30 min。
            色谱的仪器分析方法分离能力强、灵敏度高、能够                             随着反应的进行，溶液从无色变为紫色，直至变成稳
            精确定量，但是样品前处理过程复杂、成本较高、                             定的酒红色（总反应时间 40 min）， 表明 β-CD@AuNPs
            耗时耗力。因此，建立高效，快速、灵敏的性激素                             已成功制备。为了纯化 β-CD@AuNPs，将 8 mL 冷却
            检测方法对于保障化妆品安全具有重要意义。金纳                             后的溶液以 6000 r/min 离心 8 min 以除去未反应的
            米粒子（AuNPs）毒性低、生物相容性好，并且对                           β-CD（β-CD 在上层溶液中），用 1 mL 超纯水重新分
            荧光基团有很好的猝灭能力，可作为荧光共振能量                             散下层沉淀 β-CD@AuNPs（浓度为 3 nmol/L）后，
            转移（FRET）中的能量受体            [11-13] 。环糊精具有亲水         保存在 4  ℃的恒温冰箱中备用。
            的外表面和疏水的内腔，这种特性使其在药物输送、                            1.2.2   荧光检测
            分离提纯、提高疏水分子生物利用率等方面得到了                             1.2.2.1   检测步骤
            广泛的应用      [14-16] 。THIENPONT 等 [16] 利用环糊精的            将 12  μL RB(10  μmol/L)  水溶 液和 300  μL
            水溶液从人血清中预纯化孕酮和睾酮，实现了较好                             β-CD@AuNPs (3 nmol/L)水溶液加入到一系列 5 mL
            的提纯效果。                                             试管中，得到用于检测性激素的 β-CD@AuNPs-RB
                 本工作将 AuNPs 和 β-CD 相结合，采用氯金酸                   荧光探针。配制不同含量的性激素（孕酮、雌二醇、
            和 β-环糊精(β-CD)为原料，通过操作简单的一步水
                                                               睾酮）的乙醇溶液（0~15 mg/g），向 β-CD@AuNPs-RB
            热法制备了 β-CD@AuNPs。基于 β-CD@AuNPs 对
                                                               体系中加入 3 μL 的不同含量性激素溶液，最后用
            于罗丹明 B 荧光的猝灭、性激素对于 β-CD@AuNPs-
                                                               PBS 缓冲溶液（1.0 mmol/L，pH 7.6）将混合物稀释至
            RB 体系荧光的恢复现象，探索荧光恢复率与性激素
                                                               3.0 mL，并充分混合。5 min 后，将溶液转移至荧光比
            浓度之间的定量关系，构建了 β-CD@AuNPs-RB 荧                      色皿（测量溶液体积 3.0 mL）记录其荧光光谱。
            光探针，用于微量性激素的检测。本文提供了一种
                                                                   爽肤水中性激素含量的测定：将 1 mL 爽肤水
            快速简单的性激素测定方法，无需复杂的样品前处
                                                               直接与 1 mL 不同含量的性激素乙醇溶液混合，并根
            理，为化妆品中性激素的检测打开了新思路。
                                                               据上述程序检测 3 种性激素的添加量。
            1   实验方法                                           1.2.2.2   检测原理
                                                                   基于 β-CD 与不同 分子 结合力 的差 异以及
            1.1   试剂与仪器                                        AuNPs 与 RB 间的 FRET 效应检测性激素的原理如
                 氯金酸（HAuCl 4 •4H 2 O）、NaH 2 PO 4 、Na 2 HPO 4 、  图 1 所示  [11-13,17-18] 。其中，RB 为荧光信号分子，
            β-CD、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)、HCl、RB、孕酮、                   AuNPs 为荧光猝灭剂，β-CD 为识别元件。RB 先被
            雌二醇、睾酮，分析纯，国药集团化学试剂有限公                             β-CD 的空腔捕捉吸附在猝灭剂 AuNPs 的表面，RB
            司；实验用水为超纯水；高丝 GRACE ONE 爽肤水，                       和 AuNPs 之间的 FRET 效应猝灭了 RB 的荧光。随
            日本高丝集团。其他试剂为市售分析纯。                                 着性激素的加入，性激素将 RB 从 β-CD 的疏水空腔
                 EL20 分析天平，美国梅特勒-托利多公司；                        中挤出，使其远离了 AuNPs 表面，不再发生 FRET
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