Page 147 - 《精细化工》2023年第6期

第 6 期 杨 欢，等: 硼碳氮纳米管的制备及靶向递送阿霉素的抗肿瘤性能 ·1297·

实验。用不同浓度（0、10、20 μmol/L）的游离 FA x
r /%   100 （4）
预处理 MDA-MB-231 细胞 1 h；然后，加入 FA- x 0
BCNNTs-DOX（DOX 质量浓度为 1 mg/L）孵育 4 h， 式中：x 为释放 t 时刻 DOX 的质量浓度，mg/L；y 为
加入 DAPI 染色 15 min 后用 PBS（pH=7.4）洗涤 3 次， 吸光度；r 为累积释放率，%；x 0 为 DOX 的初始质量
最后采用全自动倒置微分干涉显微镜观察并成像。 浓度，mg/L。
1.5.2 细胞活力测定 1.5.4 统计分析
采用 CCK8 测定体外细胞活力。将 MDA- 采用 SPSS 软件进行单因素方差分析（ANOVA）。
MB-231 细胞接种于 96 孔板中（n=3），每孔细胞数 结果以“均值±标准偏差”表示。当 P<0.05 时，为
*
4
量为 5×10 个。培养 24 h 后，分别加入不同质量浓 数据间具有显著性差异（ ）。
度（10、20、50、100、200 mg/L）的 FA-BCNNTs
和含不同 DOX 质量浓度（0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/L） 2 结果与讨论
的 DOX、BCNNTs-DOX、FA-BCNNTs-DOX。将细
2.1 BCNNTs 的表征
胞分别培养 24、48、72 h 后，去掉培养基，重新加
对 BCNNTs 进行了 XRD、FTIR 和 SEM 测试，
入 100 μL 含有体积分数为 10% CCK8 溶液的培养基
结果见图 2 和图 3。
（不含 FBS），放回细胞培养箱继续孵育 2 h 后用多
功能酶标仪读取 96 孔板每个孔在 450 nm 处的吸光
度（OD 450 ），根据式（2）计算细胞活力：
A  A
V /%= 1 0  100 （2）
A 0
式中：V 为细胞活力，%；A 0 为不加入任何材料或药
物的对照组的吸光度；A 1 为实验组的吸光度。
采用活/死染色测定细胞活力。将 MDA-MB-231
细胞接种在细胞培养皿中（n=3），每个皿中细胞数
5
量为 2×10 个，培养 24 h；接着，分别加入质量浓
度为 800 mg/L的 DOX、BCNNTs-DOX、FA-BCNNTs-
DOX，继续培养 48 h；然后，用胰蛋白酶将细胞消
化，并用 PBS（pH=7.4）离心洗涤 3 次，最后 1 次
离心后用 100 μL PBS（pH=7.4）重悬；最后，将
Calcein-AM（1 μL）和 PI（1 μL）同时加入细胞悬
液中，染色 15 min 后，每个样品取 10 μL 加入到细
胞计数板中，通过细胞计数仪对细胞进行成像。
1.5.3 体外释放实验
配制 pH=4.5 和 7.4 的 PBS 模拟肿瘤细胞和正常

细胞的生理液环境。分别取 0.2 mL BCNNTs-DOX 图 2 BCNNTs 的 XRD（a）及 FTIR（b）谱图
和 FA-BCNNTs-DOX（质量浓度为 1 mg/L）悬浮液， Fig. 2 XRD pattern (a) and FTIR spectrum (b) of BCNNTs
4
以 1.5×10 r/min 转速离心 15 min 去除上清液；再用
0.4 mL pH=4.5 和 7.4 PBS 进行重悬，将样品编号并
置于 37 ℃的恒温摇床避光振荡，每隔一定时间离
心 10 min，每个样品均取 100 μL 上清液到新离心管
内，并重新补充 100 μL 相对应 pH 的新鲜 PBS，继

续在恒温摇床上避光振荡。释放 96 h 后，使用微量
紫外-可见分光光度计测量所有上清液样品在 488 图 3 BCNNTs 的 SEM 图
Fig. 3 SEM images of BCNNTs
nm 处的吸光度，根据 DOX 的标准曲线〔式（3）〕，
分析计算 BCNNTs-DOX 和 FA-BCNNTs-DOX 所释放 由图 2a 可见，在 2θ=26.2°和 43.2°处存在两个
的 DOX 累积量，最终根据式（4）得到 DOX 的累 特 征 衍 射峰分 别对 应于 BCNNTs （ JCPDS No.
积释放率： 53-0047）的(002)和(100)晶面 [16] ，且未观察到其他
2
y=1.20225x–0.03655 (R =0.9969) （3） 杂峰。由图 2b 可见，在 3416、2925、1391、792 cm –1