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第 1 期 郑 捷，等: 海参斑软骨多糖的纯化、结构及性质分析 ·71·

表 3 多糖抗凝血效价 合常数可推测出 Galp 残基为 β 构型 [31] 。在 δ 5.0~5.3
Table 3 Anticoagulant titers of polysaccharides 并未出现异头质子信号，这与田志强 [29] 研究的鲨鱼
FCPS-1 FCPS-2 FCPS-3 软骨多糖质子信号一致，说明 FCPS-3 中不存在
吸光度 0.061 0.102 0.287 α-Rhap 和 α-Galp A 残基的异头质子信号。在 δ
效价/(kU/g) 0.258 0.459 1.365 1.8~2.2 的较强共振信号归属于 Gal NAc 中乙酰基
（CH 3 COO—）的甲基质子信号。
肝素效价是指单位多糖相当于多少单位的肝素
1
标准品，由图 5 可知，肝素标准曲线为 y=0.1018x+ 表 4 FCPS-3 的 HNMR 化学位移和 13 13 CNMR 化学位移
1
2
0.0085（R =0.9934），在 0.2~4.0 kU/g 内符合朗伯- Table 4 HNMR chemical shift and CNMR chemical
shift of FCPS-3
比耳定律。各种组分多糖肝素效价依次为 0.258、 1 13
HNMR 化学位移 CNMR 化学位移
0.459、1.365 kU/g。其中 FCPS-3 的肝素效价最高， H-a 4.018 C-1 103.82
达到了 1.365 kU/g。其他两种肝素效价均低于 0.5 H-b 3.790 C-2 75.09
kU/g，由于效价太低，所以不予进一步研究。 H-c 3.640 C-3 78.53
UA
2.6 多糖结构分析 H-d 3,541 C-4 73.13
H-e 3.249 C-5 80.49
2.6.1 FCPS-3 的红外吸收光谱
C-6 174.61
FCPS-3 的红外光谱见图 6。
H-a 4.610 C-1 101.02

H-b 3.650 C-2 51.67
H-c 4.062 C-3 75.78
Gal NAc H-d 4.780 C-4 73.74
H-e 4.100 C-5 67.66
H-f 1,2 4.271/4.290 C-6 59.99
2.054 22.74
—CH 3 —CH 3

图 6 FCPS-3 的红外吸收光谱
Fig. 6 FTIR spectrum of FCPS-3

–1
由图 6 可知，FCPS-3 在 3404.90 cm 处有较强
而且宽度较宽的吸收峰，这是由于多糖分子内部或
者分子间存在氢键的 O—H 伸缩振动引起 [24] ；在 由表 4 可知，FCPS-3 在高场区 δ 22.74 处共振
–1
2925.36 cm 处有一个小而窄的吸收峰，这是由于多 信号为甲基碳信号。在 δ 103.82 与 δ 101.02 吸收峰
糖分子中亚甲基或者甲基中 C—H 的伸缩振动峰引 分别归属于 UA 和 Gal NAc 的 C-1，而 UA 在 δ 70~
–1
起 [25] ；在 1597.06 cm 处出现一个强而窄的吸收峰， 80 处的共振信号分别为 2~5 位碳，6 位碳在低场区
这是由于羧甲基 C==O 的伸缩振动而引起 [26] 。FCPS-3 δ174.61 处，GalNAc 在δ50~80 的共振信号属于
–1
在 1424.56、1328.07 及 1266.46 cm 处出现羰基吸 2~6 位碳。在 δ 170~180 低场区存在较强共振信号，
–1
收峰 [27] 。在 1061.84 cm 的吸收峰归属于吡喃糖单 说明含有糖醛酸，表明 FCPS-3 为一种酸性软骨糖，
元 [28] ，同时也表明有硫酸根存在，而在 602.48 cm –1 这与文献[29]研究结果相同，并且与红外图谱鉴定
处的伸缩振动峰也证明有硫酸根存在 [29] 。896.17 cm –1 结果一致。
处是 β 型吡喃糖的特征吸收峰 [30] 。从 FCPS-3 的红 2.6.3 FCPS-3 的相对分子质量测定
外图谱可知，该物质符合糖类结构，并且是一种吡 图 7 为 FCPS-3 的 GPC 出峰图。
喃酸性多糖。 校准标准曲线为 lg(M p )=14.06751.0519×V p 。其
2.6.2 FCPS-3 的核磁共振光谱分析 中，V P 洗脱体积，单位为 mL；M P 为相对分子质量，
13
1
FCPS-3 的 HNMR 化学位移和 CNMR 化学位 单位为 Da。利用 GPC 分析软件，得到 FCPS-3 的
移见表 4。UA 和 Gal Nac 的结构式如下所示。由表 M w 为 175700 Da，Z 均相对分子质量为 253032 Da，
4 可知，FCPS-3 在低场区 δ4.5~5.0 处为 β-Gal NAc M n 为 121885 Da。与文献[32]报道的软骨多糖相对
残基的异头质子信号，由异头质子的化学位移和耦 分子质量 50000~500000 Da 相似。