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第 1 期 郑 捷，等: 海参斑软骨多糖的纯化、结构及性质分析 ·67·

highest, reaching 1.365 U/mg. FTIR and NMR results revealed that FCPS-3 was acid polysaccharides and
contained sulfate as β-glucopyranose. The weight average molecular weight (M w) of FCPS-3 was 175700
Da, the Z average molecular weight was 253032 Da, and the number average molecular weight (M n) was
121885 Da. When the mass concentration of FCPS-3 was 5 g/L, its scavenging capabilities toward DPPH·,
ABTS+·, OH· free radical was 78.63%, 96.26% and 93.15%, respectively.
Key words: cartilage polysaccharide; purification; structure; heparin titer; antioxidation; biological engineering
Foundation items: Major Project of Cultivating Leading Enterprises of Small Technology Giants in 2016
(16YDLJNC00170); 2017 Demonstration Project of Science and Technology for Industrial Integration
Development of Primary, Secondary and Tertiary Industries (17ZXYENC00140)

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软骨多糖属于糖胺聚糖，是一种酸性黏多糖 。 学试剂厂；溴化钾（光谱纯），美国 Sigma 公司。肝
黏多糖是指含有糖醛酸和氨基糖残基的一种多聚 素效价检测试剂盒、DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基
糖，因为其含有丰富的糖醛酸，故称之为酸性黏多 苯肼）、ABTS（2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺
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糖 。酸性黏多糖是由氨基己糖和经过硫酸化的糖
酸），天津碧橙蓝生物科技有限公司。
醛酸交替连接而形成的长链分子，长链上有数量和
自动部分收集器，上海鹏佳科技有限公司；傅
组成不同的酸性基团，这些酸性基团大多数为硫酸
里叶红外光谱、紫外全波长分光光度计 , 美国
基团，带负电荷，可以和带正电荷的物质相结合， Thermo Fisher Scientific 公司；核磁共振波谱仪，布
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发挥其生物活性 。软骨组织中的酸性黏多糖（简
鲁克（北京）科技有限公司；凝胶渗透色谱仪，安
称软骨多糖）的主要成分为硫酸软骨素（CS），其
捷伦科技(中国)有限公司。
由 N-乙酰氨基半乳糖（Gal NAc）和葡糖醛酸（Glc
1.2 方法
A）通过 β(1→3)糖苷键连接组成重复的二糖单元构 1.2.1 多糖提取
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成 ，由于其含有的单糖种类、数目以及所连接的
将海参斑软骨剁碎，用索氏抽提装置除去脂肪。
N-乙酰氨基、N-硫酸基以及 O-硫酸基的位置不同，
按照软骨粉末与蒸馏水质量比 1∶40，水浴温度
分为硫酸软骨素 A、硫酸软骨素 B、硫酸软骨素 C 3 40 ℃，水浴时间 6 h，提取完毕，4000 r/min 离心
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种异构体 。
10 min，取上清液旋蒸浓缩，加入浓缩液 6 倍体积
酸性黏多糖广泛存在于动物组织中，包括软骨，
的无水乙醇沉淀，然后冻干得到海参斑软骨多糖粗
肝脏及其他组织。软骨组织中的酸性黏多糖存在于
2+
关节软骨中，具有固定 Ca 的作用，因而在成骨过 品 CPS。
[6]
[7]
程中起重要作用 。许永安 等研究了鲟鱼软骨多糖 1.2.2 多糖脱蛋白
称取一定质量的 CPS，溶于 10 mL 蒸馏水后，
的生物活性，发现其具有良好的抗肿瘤活性。
加入 4 倍体积的 Sevag 试剂（由正丁醇和氯仿按体
海参斑为一种深海鱼种，软骨含量丰富。在加
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工过程中软骨一直没有得到充分利用。郑捷等 已 积比 1∶5 混合配制而成），充分振荡摇匀后静置，
分液除去蛋白，重复数次以除尽蛋白。
经对不同方式提取的海参斑软骨多糖进行了提取以
1.2.3 多糖的纯化
及抗氧化活性测定。结果显示，水提法提取的海参
1.2.3.1 DEAE-52 纯化多糖
斑软骨多糖抗氧化活性最高，但是未对多糖进行深
将 DEAE-52 分别使用 0.5 mol/L 的氢氧化钠和
入纯化以及结构分析。本实验拟对水提法提取的多
盐酸反复浸泡活化，用蒸馏水清洗至中性，然后将
糖进行纯化及结构分析，并做抗氧化活性以及肝素
DEAE-52 轻轻导入层析柱中（4 cm×30 cm），待
效价测定，为海参斑软骨的进一步开发利用提供科
DEAE-52 灌注完毕，用蒸馏水平衡过夜。然后，将
学依据和理论指导。
经过脱蛋白的多糖以蒸馏水溶解后上样，上样量为
1 实验部分 柱体积的 3%，用蒸馏水配制 0、0.1、0.2、0.3、0.4
和 0.5 mol/L 的 NaCl 溶液作为流动相，控制流速为
1.1 材料、试剂与仪器 1 mL/min，每管收集 5 mL，每个洗脱相收集 40 管，
海参斑软骨，天津市三立水产有限公司； 用苯酚-硫酸法 测每管多糖含量。以收集管数为横
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Sephadex G-75 葡聚糖凝胶、DEAE-52 离子交换纤 坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，将曲线峰
维素，天津市碧橙蓝生物科技有限公司；氯仿、正 尖处试管中的多糖溶液合并，收集透析（用截留分
丁醇、苯酚、氯化钠、硫酸、咔唑，AR，天津市化 子量为 500 Da 的透析袋），冻干后得到 CPS-1、