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第 4 期                        刘晓燕，等:  大孔吸附树脂纯化东北岩高兰总黄酮                                    ·665·


                 东北岩高兰（Empetrum nigrum L. var. japonicum K.        Thermo  UltiMate  3000 高效液相色谱仪（美国
            Koch）为岩高兰科（Empetraceae）岩高兰属（Empetrum.              Thermo  Fisher  Scientific 公司）；玻璃层析柱（254
            L）珍贵药用植物，又名夜明豆、黑果子                   [1-2] ，主要     mm×32 mm，深圳市三利化学品有限公司）。
            产于东北大兴安岭地区。东北岩高兰是珍稀濒危的                             1.2    样品溶液的制备
            药用植物，是中国仅存的一个岩高兰科变种而且是                                 取干燥好的东北岩高兰药材，粉碎后过 30 目
                                                [3]
            大兴安岭北部林区的国家二级保护植物 。东北岩                             筛，用体积分数为 95%的乙醇（料液比为 1∶10，
            高兰全草都有药用价值，除了具有滋阴保肝、补脾                             料指东北岩高兰药材，单位 g；液指体积分数 95%
            养胃、舒心明目等药用价值外，还能够抗坏血病，                             的乙醇溶液，单位 mL）回流提取 3 次，每次 1 h，
            预防和治疗心肌炎、酒精性脂肪肝和冠心病等                      [4-5] 。  将药液过滤，在旋转蒸发仪上浓缩乙醇得到浸膏。
            东北岩高兰的枝叶还可以泡茶饮用，起到消化和提                             根据所需浓度取适量浸膏用一定量乙醇溶解，得到
                         [6]
            神等养生作用 。东北岩高兰的化学成分有黄酮类、                            样品溶液。取浸膏 2.5 g 准确加入 500 mL 去离子水
            三萜类和酚类，其主要化学成分是黄酮类。许多黄                             溶解，得到上样量的样品溶液。
            酮类化合物具有止咳、祛痰、平喘及抗菌的活性，                             1.3    HPLC 测定方法
            而且能用于防治心脑血管疾病，因此分离纯化东北                                 绘制标准曲线可知，HPLC 色谱峰面积（A）与
            岩高兰中的黄酮类化合物具有重要意义。张玉莲                        [7]   被测物的浓度呈线性关系，因此，吸附量和解吸量
            等采用硅胶、Sephadex  LH-20、半制备 HPLC 柱色                  采用 HPLC 测定的峰面积（A）来表示。
            谱法等，从东北岩高兰体积分数为 95%的乙醇提取                               对东北岩高兰的 HPLC 条件进行了优化，分别
            物中分离得到 12 个化合物，其中有多个黄酮类化合                          以甲醇-磷酸（磷酸的体积分数为 0.1%），甲醇-水体
                     [8]
            物；赵明 等采用硅胶柱色谱和高效液相色谱等方                             系作为流动相进行洗脱，结果显示，采用甲醇-水（0~
            法，从东北岩高兰甲醇浸泡液正己烷萃取物中分离                             20  min 甲醇的体积分数由 60%到 90%，20~35  min
            得到 6 个查耳酮类化合物并鉴定其结构。黄淑蕾                      [9]   甲醇的体积分数为 90%）梯度洗脱 35 min 结果较好。
            等从东北岩高兰的正己烷萃取物中分离得到 6 个三                           利用 DAD 检测器检测在 220、254、300 nm 下东北
            萜类化合物，采用高效液相色谱和硅胶柱色谱等技                             岩高兰样品溶液中各成分吸收峰的变化，结果显示，
            术进行分离纯化。以上工作都是采用硅胶柱色谱法                             220  nm 下灵敏度最高，吸收最强，则以 220  nm 为
            分离纯化单一化合物，研究的是化学成分，而本文                             检测波长。最终确定色谱柱为Spherigel C18 柱（250 mm×
            使用大孔吸附树脂对东北岩高兰总黄酮的纯化工艺                             4.6 mm I.D，5 μm），流动相为甲醇-水（0~20 min 甲
            进行研究。目前，未见使用大孔吸附树脂来纯化东                             醇的体积分数由 60%到 90%，20~35  min 甲醇的体
            北岩高兰总黄酮的报道。大孔吸附树脂是具有一定                             积分数为 90%），流速为 1.0  mL/min，检测波长为
            吸附能力的有机聚合物，具有吸附快、稳定性好、                             220 nm，柱温为 25 ℃，进样量为 15 μL。
            洗脱率高和再生简便等诸多优点，在分离纯化中草药                            1.4   大孔吸附树脂的筛选
            成分和研制新药中被广泛应用            [10-11] 。                 1.4.1    树脂的预处理
                 本文选用大孔吸附树脂对东北岩高兰总黄酮进                              取适量不同型号大孔吸附树脂，加入体积分数
            行纯化，通过静态与动态实验考察了东北岩高兰总                             95%的乙醇浸泡 24  h。湿法装柱后，用大量体积分
                                                               数 95%的乙醇洗涤树脂，洗涤至层析柱流出液加水
            黄酮的纯化工艺，旨在为东北岩高兰药用成分的开
                                                               〔V(流出液)∶V(水)=1∶5〕不呈白色浑浊，再用去
            发和利用提供理论参考。
                                                               离子水洗至流出液澄清并且没有醇味。
            1   实验部分                                           1.4.2    树脂静态吸附和解吸能力的考察
                                                                   分别准确称取 0.5 g 已处理好的 8 种不同型号的
            1.1   材料、试剂与仪器                                     大孔吸附树脂（AB-8、HPD-100、HPD-500、DM-130、
                 东北岩高兰药材购于内蒙古自治区根河市，经                          HPD-826、HPD-400、HPD-722、D-101）装于具塞
            聊城大学生命科学院钱关泽教授鉴定为东北岩高兰                             锥形瓶中，分别加入 0.25 kg/L 样品溶液 5.0 mL，置
            全草（包括根、茎和叶）。AB-8、HPD-100、HPD-500、                  于 30 ℃恒温摇床上振摇 24 h，取 1 mL 吸附后的溶
            DM-130、HPD-826、HPD-400、HPD-722、D-101               液进行 HPLC 测定。将吸附饱和后的树脂过滤再向
            型大孔吸附树脂（沧州宝恩化工有限公司）。无水乙                            其中加入 5 mL 体积分数 95%的乙醇溶液进行解吸，
            醇为 AR（烟台远东精细化工有限公司），用于 HPLC                        置于 30 ℃恒温摇床上振摇 24 h，取 1 mL 解吸后的
            的甲醇为色谱纯（美国 Sigma-Aldrich 股份有限                      药液用 HPLC 测定。根据下式计算树脂的吸附率和
            公司）。                                               解吸率：
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