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第 4 期 薛宏坤,等: 黑加仑花色苷的分离纯化及其热降解动力学 ·723·
为 1.5 mL/min,按照 10 mL/管连续收集不同时间段 为黑加仑花色苷初始质量浓度,g/L。
的洗脱液,依据洗脱液吸光度的大小,将收集后的 1.2.6 黑加仑花色苷热降解动力学模型
[9]
洗脱液经减压浓缩干燥,可获得 2 种黑加仑花色苷 采用试错法 构建温度为 50~90 ℃,间隔为
粉末,分别为 A 3 和 A 4 。 10 ℃,处理时间为 0~4 h,间隔为 1 h 的降解动力学
1.2.2 黑加仑花色苷结构鉴定 模型。其原理如下:假设反应级数为零级、一级、
样品处理:将黑加仑花色苷浓缩液、A 3 和 A 4 , 二级,则反应物质量浓度ρ与时间 t、ln/ 0 与时间
分别用体积分数 0.1% HCl-甲醇溶液稀释后,配制成 t、1/与时间 t 均呈线性关系,相应线性回归系数最
质量浓度为 0.1 g/L 的样品溶液,溶液过 0.45 μm 滤 高的模型被认为是花色苷热降解动力学模型,其模
[9]
型分别如式(3)~(5)所示 。
膜,用于 HPLC 分析。
kt (3)
色谱条件: Aglient-1100 C 18 柱( 150 mm× 0 0
ln kt (4)
/
4.6 mm,2.6 μm);流动相 A 为体积分数 5%甲酸水 0 1
溶液,流动相 B 为乙腈-水-甲酸(三者体积比 57.5∶ 1/ 1/ kt (5)
2
0
40.0∶2.5);洗脱程序:0~10 min,5%~20%流动相 式中:k 0 、k 1 、k 2 分别为零级、一级和二级降解速率
常数;t 为加热时间,h。
B,保持 5 min;15~30 min,20%~25%流动相 B,
黑加仑花色苷半衰期 t 1/2 (h)根据式(6)计算 [10] 。
保持 5 min;35~40 min,25%~30%流动相 B,保持
5 min;40~42 min,30%~5%流动相 B,保持 5 min; t 1/2 ln 0.5 / k (6)
活化能可以利用 Arrhenius 方程计算得出,其方
流速为 0.8 mL/min;柱温为 25 ℃;进样量为 25 μL;
程如式(7)所示 [10] 。
检测波长为 520 nm。质谱条件:采用正离子扫描方
ln k ln A E / R T (7)
式,质量扫描范围 m/Z 200~2000,毛细管电压 4.5 0 a
5
kV,雾化器压力 1.5×10 Pa,干燥温度 220 ℃。 式中:E a 为活化能,kJ/mol;R 为气体常数;T 为绝
1
对温度,K;A 0 为频率因子,h ;k 为反应速率常
1.2.3 不同 pH 下黑加仑花色苷溶液的热处理
数,mg/(L·min)。
称取一定量样品 A 1 、A 2 、A 3 和 A 4 ,用体积分
1.2.7 黑加仑花色苷抗氧化活性
数 60%乙醇水溶液配制成 1 g/L 的花色苷溶液,用 2
1.2.7.1 DPPH 自由基清除能力测定
mol/L HCl 和 2 mol/L NaOH 将样品 pH 分别调至 3.0 [11]
参照封燕 等的方法并略作改动。将 A 1 、A 2 、
和 7.0,分装于具塞试管中,每支试管中样品量均为
A 3 和 A 4 配制成质量浓度为 2、4、6、8、10、12、
20 mL,分别放置于 50、60、70、80、90 ℃的恒温
20 和 30 mg/L 的样品溶液,分别取出 2 mL 置于
水浴锅中,避光加热 4 h,依据紫外分光光度法测定
10 mL 比色管中,然后分别加入 2.8 mL 浓度为 0.1
每隔 1 h 样品中花色苷含量变化,每组实验重复 3 mmol/L DPPH 溶液并将其充分混合,避光室温下放
次,取平均值。 置 30 min,在 517 nm 处分别测定其吸光值,以同样
1.2.4 黑加仑总花色苷的测定 的方法测定相同质量浓度 V C 对 DPPH 自由基清除能
[8]
参考于泽源 的方法测定不同实验条件下所得 力,按照式(8)计算 DPPH 自由基的清除率。
提取液中总花色苷的含量。样品中花色苷的质量浓 DPPH自由基清除率 / % A ( c A s / A ) c 100 (8)
度由式(1)计算得出。 式中:A c 为对照品吸光度;A s 为样品溶液吸光度值。
[(A 516 A 700 )pH 1.0 (A 516 A 700 )pH 4.5 ] 449.2 1000 下同。
f (1)
26900 l 1.2.7.2 ABTS 自由基清除能力测定
+
式中:ρ为花色苷质量浓度,g/L;pH 1.0 和 pH 4.5 为样 [12]
参照李楠 等的方法并稍作修改。将 A 1 、A 2 、
品溶液的 pH 为 1.0 和 4.5;A 516 和 A 700 为样品在 516 A 3 和 A 4 配制成质量浓度为 30、50、80、100、120、
和 700 nm 处的吸光度;f 为稀释倍数;449.2 为矢车 160、200 mg/L 样品溶液,分别取出 0.4 mL 置于
菊素-3-葡萄糖苷标准品的相对分子质量;26900 为矢 10 mL 比色管中,然后加入 4 mL 浓度为 7.0 mmol/L
车菊素-3-葡萄糖苷标准品的消光系数,L/(molcm); ABTS 工作液,避光室温下放置 10 min,在 734 nm
+
l 为比色皿光程,cm。 处分别测定其吸光值。以相同质量浓度 V C 代替样品
1.2.5 黑加仑总花色苷残留率测定 作对照,按照式(9)计算 ABTS 自由基的清除率。
+
计算不同 pH、温度和时间下样品花色苷残留 ABTS 自由基清除率 / % A ( A / A ) 100 (9)
c s c
率,将式(1)中的ρ带入到式(2)中可以得到花
1.3 数据处理
色苷残留率。
采用 SPSS 22.0 软件对每一组实验数据进行方
残留率 / % t / 0 100 (2) 差分析(ANOVA);利用 SAS8.0 软件分析结果的显
式中: 为 t 时刻黑加仑花色苷质量浓度,g/L; 0 著差异;用 Origin 9.0 进行绘图和数据拟合。
t