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第 7 期                     樊永康，等:  负载槲皮素的酪蛋白-果胶纳米粒子的构建                                   ·1309·


            提高其储藏稳定性。槲皮素结构如下所示：                                有限公司。

                                                               1.2   方法
                                                               1.2.1    CS、LMP 溶液的制备
                                                                   参考 Jung 等  [10] 方法并作修改。分别将 1  g  CS
                                                               和 1  g  LMP 溶于 100  mL 超纯水中，配成质量分数
                                                               为 1% CS、1% LMP 溶液，分别加入质量分数 0.02%

                                                               的叠氮化钠防止微生物生长，室温下磁力搅拌 6 h，
                 蛋白质具有营养价值高、安全性高、价格低廉、                         然后转移到 4  ℃冰箱过夜使酪蛋白颗粒充分溶胀。
            容易获得等优点，可用来包埋运载小分子物质。酪                             将 CS、LMP 溶液在 4  ℃，4000 r/min 离心 30 min，
            蛋白（Casein，CS）是牛乳中含量最高的蛋白质，
                                                               分别得到 10 g/L 的 CS、LMP 溶液。
            占乳蛋白总量的 76%~86%，由 α s1 -酪蛋白、α s2 -酪蛋               1.2.2    CS-LMP 纳米复合物的制备
            白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白组成，分子量在 19  kDa~                          参考 Jung 等  [10] 方法并作修改。分别取 5 mL 的
            25 kDa。酪蛋白是必需微量元素、氨基酸的天然载                          CS、LMP 溶液，用 0.1 mol/L 的 HCl 和 NaOH 将溶
            体，能够自组装形成胶束，是包埋小分子等物质的                             液的 pH 调为 7.0，为了确定最佳的 CS 和 LMP 的浓
            良好材料     [7-8] 。                                   度，将 CS 和 LMP 溶液各取 5 mL 混合。CS 的质量
                 蛋白质在溶液的 pH 接近其等电点（pI）或溶液                      浓度分别为 0.5、1.0、1.5、2.0 g/L，LMP 的质量浓
            的离子强度较高时容易形成不溶性的聚合物沉淀，
                                                               度分别为 0、0.5、1.0、2.0、4.0 g/L，调溶液 pH=4.0，
            有研究表明,通过静电吸附作用能使蛋白质和多糖                             得到不同浓度的 CS-LMP 纳米复合物溶液。
            形成静电复合体用于改善蛋白质的稳定性                    [9-10] 。目前       透光度（Transmittance，Tt）测定：取 3 mL CS-LMP
            关于利用酪蛋白和果胶包埋槲皮素的研究较少。本                             纳米复合物溶液于石英皿中，在波长 600 nm 处测其
            研究旨在构建负载槲皮素的酪蛋白-果胶（Low                             吸光值 A 0 ，透光度 A=10     A 0 ，每个样品重复 3 次。
            Methoxyl  Pectin，LMP）纳米粒子，并对其性质进                   1.2.3    pH 对 CS-LMP 稳定性的影响
            行研究。首先利用静电吸附法构建 CS-LMP 纳米粒                                                [11]
                                                                   参考 Ilysoglu 等方法      并作适当修改。为了评
            子，在此基础上，构建负载了槲皮素的纳米粒子，                             估 pH 对复合物稳定性的影响，将 1 g/L CS 溶液、2
            并对其结合机理、热稳定性、抗氧化能力进行研究。                            g/L LMP 溶液、CS-LMP 复合物溶液（1 g/L CS，2 g/L

                                                               LMP）的 pH 分别调至 2.0~7.0（每隔 0.5 一个梯度）
            1   实验部分
                                                               11 个不同的 pH，分别测定溶液的透光度和 Zeta 电位。
            1.1   试剂与仪器                                            Zeta 电位  [12] ：将待测样品稀释 1000 倍后，采
                 酪蛋白、果胶（酯化度 20%）、槲皮素（质量分                       用纳米粒度仪测定不同 pH 下 CS-LMP 复合体系的
            数为 95%）、槲皮素标准品（质量分数为 98%）、1,1-                     Zeta 电位，测定条件如下：1 cm 聚苯乙烯比色池，
                                                                     2
            二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）（质量分数为 98%）、                      0.45 cm 铂电极，间距为 0.4 cm。平衡时间 2 min，
            2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）（质                     测定温度 25  ℃。每次循环扫描 10~100 次，每个样
            量分数为 98%），上海阿拉丁生化科技有限公司；无                          品重复测量 3 次。
                                                                       2+
            水乙醇、浓盐酸、氢氧化钠、氯化钙、三氯乙酸，                             1.2.4    Ca 浓度对 CS-LMP 稳定性的影响
            均为市售分析纯，购自上海国药试剂有限公司。                                  为了评估 CaCl 2 溶液的浓度对 CS、CS-LMP 纳
                 UV-2600 紫外可见分光光度计，日本岛津公司；                     米粒子稳定性的影响。分别配制 CS-LMP 溶液（1 g/L
            冷冻干燥机，德国 Christ 公司；Milli-Q 超纯水仪，                   CS、2 g/L LMP）及不同质量浓度 CaCl 2 溶液（10、
            美国 Millipore 公司；AVATAR370 傅里叶变换红外                  20、40、80、120 g/L），将溶液的 pH 调至 4.0。取 1 mL
            光谱仪，美国 Nicolet 公司；Cary  Eclipse 荧光分光               上述 CaCl 2 溶液加入到 CS-LMP 复合物溶液中，室
            光度计，美国瓦里安公司；扫描电子显微镜，日本                             温下过夜孵育，测定复合物粒径、PDI（分散性指数）、
            Hitachi 公司；高速离心机，湖南湘仪仪器有限公司；                       Zeta 电位。
            Zetasizer  Nano  ZS-90 纳米粒径电位分析仪，英国                    粒径大小和 PDI 的测定         [12] ：将待测样品稀释
            Malvern 公司；SLHW-4 四联加热数显恒温磁力搅拌                     1000 倍后，采用纳米粒度仪测定其粒径大小。平衡
            器，杭州仪表电机有限公司；HH-S 恒温水浴锅，常                          时间 2 min，测定温度 25  ℃，所用光源为最大输出
            州翔天实验仪器厂；电子天平，赛多利斯有限公司；                            功率 10 W 的 He-Ne 激光，检测角为 90，检测波长
            HZ-8812S-B 水浴恒温振荡器，江苏太仓华利达公                        为 633 nm。避免多重光散射，每次循环扫描 10~100
            司；pHS25 数显 pH 计，梅特勒-托利多仪器（上海）                      次，每个样品重复测量 3 次。
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