Page 126 - 精细化工2019年第8期

·1614· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

2.2.2.3 洗脱剂流速对树脂解吸过程的影响 2.4 分离目标组分 HMG 的纯度检测和结构验证
由图 5 可看出，动态洗脱过程中，当洗脱剂流 2.4.1 高效液相色谱的纯度测定
速较低时，主要组分均有较高的解吸效果，但流速 半制备液相制得的目标组分 HMG 的高效液相色
过慢会延长生产周期 [22] 。而当洗脱流速慢慢增大至 谱图如图 7 所示。该目标组分的保留时间为 14.63 min，
1.2 mL/min 时，3 种主要组分橙皮苷、HMG 和橙皮 与 HMG 标准物质的出峰时间一致，故纯化后得到
素的解吸率分别为 91.3%、89.4%和 85.8%，解吸率 的目标组分即为中间体 HMG，显然纯化后的 HMG
降低的幅度较小。继续增大流速，洗脱剂与树脂接 纯度较高，采用面积归一法测得 HMG 的纯度为
[1]
触时间过短，解吸率显著下降。为既能节约时间， 98.21%，相较于单艳等 的硅胶柱法得到的 HMG
减少纯化作业周期，又能尽可能地使得各组分被洗 纯度（91.71%）提高较大。
脱完全，故选定洗脱剂流速为 1.2 mL/min。

图 7 HMG 标准品（a）和分离目标组分 HMG（b）的高

图 5 洗脱剂流速对 HPD300 树脂解吸酶解液中主要组分 效液相色谱图
的影响 Fig. 7 HPLC of HMG standard (a) and the isolated HMG
sample (b)
Fig. 5 Effect of flow rate of eluent on the desorption of
main components on HPD300 resin
2.4.2 HMG 的紫外光谱、红外光谱和 XRD 分析
2.3 HPD300 大孔吸附树脂的初步纯化 将半制备液相制得的目标组分与底物橙皮苷在
经 HPD300 大孔吸附树脂的分离纯化后，酶解 225~450 nm 波段进行紫外光谱扫描，结果如图 8A
液中的主要组分橙皮苷、HMG 和橙皮素的含量均有 所示。显然分离纯化后的 HMG 与底物橙皮苷均在
显著提高。图 6 是树脂纯化前后的酶解液中主要组 284 和 330 nm 处有较大的紫外吸收峰，分别对应着
分的高效液相色谱图。从图中可看出，纯化后酶解 A 环苯甲酰系统峰带（带Ⅱ）和 B 环桂皮酰基系统
液中的杂质峰基本被消除了，且酶解液中主要组分 （带Ⅰ），此时带Ⅱ为主峰，带Ⅰ强度较弱。且目标
的质量分数由纯化前的 80.37%提高到 97.83%，这 组分 HMG 和底物橙皮苷的主要紫外吸收峰带基本
表明酶解液经 HPD300 大孔树脂分离纯化后，有效 一致。
去除了酶解液中的盐类、糖类等杂质，实现了主要 目标组分 HMG 和底物橙皮苷在 4000~500 cm –1
组分的富集。 波数的红外吸收光谱如图 8B 所示。图中，HMG 的
–1
光谱图在 3418.7 cm 处有较强的特征吸收峰，这可
能是由 HMG 苯环上的 O—H 伸缩振动引起的；
–1
2917.2、2849.7 cm 的吸收峰可能与 B 环—OCH 3 上的
–1
C—H 伸缩振动有关；1644.3 cm 处的特征峰对应
–1
于 C 环上的 C==O 振动；1500~1600 cm 处的强吸
收峰对应于苯环骨架中的 C=C 伸缩振动。显然在
–1
1000~1100 cm 处橙皮苷的特征吸收峰比 HMG 的
吸收峰密集，这正对应于 HMG 的糖基部分比橙皮
苷少一分子的糖。

目标组分 HMG 和橙皮苷在 5~90的 X 衍射谱
图 6 HPD300 树脂纯化前（a）和纯化后（b）酶解液的 图如图 8C 所示。结果表明，底物橙皮苷的结晶度
高效液相色谱图 较高，该物质晶体衍射峰峰形较尖锐且物质的基线
Fig. 6 HPLC of enzymatic hydrolysis solution before (a)
and after (b) purification by HPD300 resin 较平；而 HMG 的基线下移，且各衍射峰聚集，分