Page 127 - 精细化工2019年第8期

第 8 期 王 幻，等: 橙皮苷酶解液中橙皮素单糖苷的分离纯化 ·1615·

离度很低，说明 HMG 是非晶态物质，含有大量非 这可能是因为羟基自由基是水溶性自由基，而 HMG
晶形峰。此外，橙皮苷的最高衍射峰处（2θ= 19.66） 的水溶性好于橙皮苷和橙皮素 [23] 。当 HMG 的质量
的晶面间距为 4.512 nm，而 HMG 的最高衍射峰 浓度从 0.25 g/L 增加到 1.25 g/L 时，羟基自由基清
（2θ=23.19）的晶面间距为 3.832 nm。因此，酶解 除率从 30.13%1.26%增加到 72.31% 1.00%，其清
底物与产物 HMG 的结晶形态在酶解过程中有较大 除作用低于抗坏血酸，但 HMG 对羟基自由基仍有
的变化。 一定的清除活性。

图 9 橙皮苷、HMG 和橙皮素对羟基自由基的清除效果
Fig. 9 Scavenging effect of hesperidin, HMG and hesperetin
from enzymatic hydrolysis on the hydroxyl radical

3 结论

（1）比较筛选 6 种大孔吸附树脂，优选出 HPD300
大孔树脂进行橙皮苷酶解液中 HMG 进行富集，同
时会富集橙皮素及橙皮苷，去除酶解液中鼠李糖和
葡萄糖等杂质。
（2）HPD300 大孔树脂对酶解液中 3 种主要
非糖组分的静态和动态总吸附量分别为 48.35 和
35.82 mg/g，其中，对橙皮苷、HMG 和橙皮素的解
吸率分别可达 91.3%、89.4%和 85.8%。
（3）在 10 BV、体积分数 45%的乙醇以 1.2 mL/min
流速的条件下进行 HPD300 树脂洗脱，初步纯化后
的酶解液中 3 种主要组分的质量分数从 80.37%提高
到 97.83%。
（4）在半制备液相进一步分离纯化下，得到单

A—紫外光谱；B—红外光谱；C—X 射线衍射图 体 HMG 的质量分数为 98.21%，并通过紫外可见光
图 8 目标组分 HMG（a）和橙皮苷（b）的光谱图和 X
谱、红外光谱和 X 射线衍射确证产物为 HMG。
射线衍射图
Fig. 8 UV-Vis and IR spectra and XRD patterns of the target （5）体外羟基自由基清除实验结果表明，分离
component HMG (a) and hesperidin (b) 纯化后 3 种单体组分橙皮苷、HMG、橙皮素均有一

2.5 橙皮素、HMG 和橙皮苷的体外羟基自由基清 定的抗氧化活性，HMG 和橙皮素抗氧化能力接近，
除活性 远大于橙皮苷，但三者的羟基自由基清除能力均小
图 9 为橙皮苷、HMG 和橙皮素对羟基自由基的 于 V C 。
清除效果。 （6）橙皮苷酶解液中 HMG 经树脂分离和半制
由图 9 可知，质量浓度为 0.25~1.25 g/L 的橙皮 备液相纯化是可行的，实现 HMG 和橙皮苷、橙皮
苷、HMG 和橙皮素对羟基自由基的清除作用均呈浓 素 3 种近似化合物的分离，为橙皮苷酶法转化为新
度依赖型。目标组分 HMG 和橙皮素对羟基自由基 橙皮苷提供方法参考，具有工业化放大前景和潜在
的清除作用相近，但远大于酶解底物橙皮苷的作用， 应用价值。