Page 131 - 精细化工2019年第8期

第 8 期 薛宏坤，等: 树莓果渣总花色苷和总多酚微波萃取工艺及组分分析 ·1619·

采用响应面分析法得到的二次回归模型能够描 项的回归系数。
述萃取条件（变量）和总花色苷、总多酚含量（响 1.2.4 总花色苷含量测定
应）之间的关系，其模型如式（1）所示。 采用 pH 示差法测定不同提取条件下样品中总
[11]

Y   0  k   i X  i  k  ii X  ii  2 k 1 k  ij X X （1） 花色苷含量，参考于泽源等 方法并略做改动。取
1 mL 样品，分别加入 9 mL pH=1.0 氯化钾缓冲液和
j
i
i 1 i 1 i j 9 mL pH=4.5 乙酸钠缓冲液，将其充分混合，避光
式中：Y 分别为总花色苷、总多酚含量，mg C3G/g、 静置 1 h，分别在 520 和 700 nm 处测定其吸光值，
mg GAE/g；X i 、X j 为自变量；β 0 为截距回归系数；β i 计算提取液中花色苷的浓度，其表达式如式（2）
为线性回归系数；β ii 为二次项回归系数；β ij 为交互 所示。
A
A
c    520 nm  A 700 nm  pH  1.0  520 nm  700 nm  p H  4.5   M  w D A F  V  1 0 0 0  （2）
M 
L m
a
式中：c 为样品中总花色苷含量，mg C3G/g；A 为 射镀膜仪在样品表面镀上一层 1500 nm 厚度的金
样品提取液的吸光值；DF 为稀释倍数；M w 为矢车 膜，用于电镜实验。分形维数（Fractal dimension, FD）
菊素-3-葡萄糖苷的相对分子质量（449.2）；M a 为矢 可以定量计算样品细胞壁破裂程度。利用 Image J
车菊素-3-葡萄糖苷的消光系数（26900）；L 为比色 软件计算各微观结构图像 FD（FD 越小，说明细胞
皿光程，cm；V 为总体积，mL；m 为样品质量，g。 破壁程度越显著 [13] ），其方程如式（3）所示。
1.2.5 总多酚含量测定 I ()r
D  lim （3）
不同提取条件下样品总多酚含量测定参考 i r 0 log(1/ )r
Koyu 等 [12] 的方法并稍作改动。准确量取 100 L 样 式中：r 为盒子尺度；D 为分形维数值。
品稀释至 500 L，加入 1.25 mL 福林酚试剂，将其 1.3 数据处理
搅拌混合，室温避光反应 4 h，再加入 1.00 mL 饱和 每次实验重复 3 次，结果用平均值标准差表
Na 2 CO 3 溶液，室温避光静置 2 h，在 760 nm 处测定 示。采用 SPSS 22.0 软件对每一组实验数据进行方
样品吸光度，以没食子酸标准品绘制标准曲线，得 差分析（ANOVA）；利用 SAS 8.0 软件分析结果的
2
到方程为：y=4.8106x+0.0735（R =0.9997），没食子 显著差异。
酸在 10~250 kg/L 内有良好的线性关系，结果以毫
克 没食子酸 （ gallic acid, GAE ） 当量表示 2 结果与讨论
（mg GAE/g）。
2.1 模型建立与显著性检验
1.2.6 HPLC-ESI-MS 法测定样品花色苷组分
确定 RSM 优化微波辅助萃取树莓果渣中总花
样品准备：将最优提取工艺下获得的提取液，
色苷、总多酚最佳工艺条件，所得的实验方案和结
配制成质量浓度为 0.1 g/L 的样品溶液，过 0.45 μm
果见表 2。以总花色苷含量（Y 1 ）和总多酚含量（Y 2 ）
滤膜，然后进行 C 18 固相萃取柱，最后将滤液缓慢
为响应值，对实验所得的数据进行多元回归拟合分
压过柱子，用去离子水去除干扰物质后，体积分数
析，得到响应值对 X 1 （萃取温度）、X 2 （液料比）、
5%甲醇洗脱目标物质，收集洗脱液，经 0.22 μm 滤
X 3 （萃取时间）的回归方程，如下所示：
膜，滤液作为待测液备用。

HPLC 条件：色谱柱：XDB-C 18 色谱柱（4.6 mm× Y   1 4.3003 0.0880X  1 0.3836X  2 0.0706X  3
0.0017XX  0.0001X X  0.0013X X 
250 mm×5 μm）；流速：0.8 mL/min；进样量：20 μL； 1 2 1 3 2 3
温度：25 ℃；检测波长 520 nm；流动相由乙腈（A） 0.0010X  1 2 0.0101X  2 2 0.0009X 3 2 （4）
和体积分数 0.1%甲酸水溶液（B）构成，梯度洗脱 Y   2 101.7722 2.9100X 1  0.3180X  2
如下（以下百分数均为体积分数）：0~45 min：0~45% 1.6600X  0.00118X X  1 2 0.0216X X  1 3
3
A，100%~55% B；45~60 min：45%~0 A，55%~100% 0.0453XX  0.0209X  2 0.0459X  2
B；质谱条件：正离子模式，全自动二级质谱扫描， 2 2 3 1 2
5
扫描范围：50~1000 m/Z；干燥气压力：2.76×10 Pa； 0.0273X 3 （5）
流量：12 L/min；温度：350 ℃，毛细管电压：3500 V。 对回归方程（4）和（5）系数进行显著性检验，结
1.2.7 树莓果渣颗粒微观结构分析 果如表 3 所示。
将经微波处理和常规溶剂萃取后得到的样品， 由表 3 可知，方程（4）一次项中 X 1 、X 2 为极
干燥后分别均匀地粘在铝制托盘上，之后用离子溅 显著，X 3 为显著，因素对树莓果渣总花色苷含量影