Page 151 - 精细化工2019年第8期
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第 8 期                    张   文,等:  不同前处理对动物组织中氯丙嗪残留检测对比                                 ·1639·


            允许作治疗用,但在动物性食品中不得检出。因此,                            >99.5%,德国 Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司;β-葡糖
                                                                                                  7
            找到一种快速、准确的氯丙嗪检测方法对于实现食                             苷醛甙酶-芳基硫酸酯酶,酶活≥8.5×10  units/L,美
            品中氯丙嗪含量的有效监管具有重要意义。                                国 Sigma 公司产品;N-丙基乙二胺吸附剂(PSA)、
                 近年来,检测氯丙嗪的方法有酶联免疫法                            十八烷基键合硅胶吸附剂(C 18 )、无水硫酸镁、石
                                                      [8-10]
            (Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)    、     墨化碳黑吸附剂(GCB),成都雅源科技有限公司;
            气相色谱法      [11] (Gas chromatography,GC)、高效液        甲醇、乙腈、无水乙醇、甲酸,色谱纯,德国 Merck
            相色谱法(High performance liquid chromatography,       公司;实验用水由 UV-R 超纯水机制备。
            HPLC )   [12]  、气 相色 谱 - 质谱 联用 法( Gas                  Agilent  6420  Triple  Quad 液质联用仪〔配有
            chromatography-mass spectrum,GC-MS)   [13] 、液相     Agilent  1290 超高效液相色谱仪,电喷雾离子源
            色谱 - 质谱联用法( Liquid  chromatography-mass            (ESI)及 Masshunt 数据处理系统〕、Agilent SB-C 18
            spectrum/ mass spectrum,LC-MS/MS)  [4,14-16] 等。其   色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm),美国 Agilent 公
            中,酶联免疫法稳定性和重复性较差,易造成漏检                             司;UV-R 超纯水机,法国 Millipore  公司;S220 pH
            和假阳性。色谱法干扰大,灵敏度低,定性能力较                             测定仪,瑞士 Mettler-Toledo 公司;量程 10~100 μL、
            差。GC-MS 虽有较好的灵敏度,但需要进行衍生化,                         100~1000  μL 和 1~10  mL 移液器,德国 Eppendorf
            耗时较长且操作繁琐。LC-MS/MS 具有较高的灵敏                         公司;T25 高速组织匀浆机,德国 IKA 公司;MTN-
            度,选择性和特异性较好、可以提供待测物的结构                             5800A 氮吹浓缩装置,天津奥特赛恩斯仪器有限公
            信息,是检测氯丙嗪的理想方法。                                    司;VP6122050 抽滤装置,美国 Cole-Parmer 公司;
                 动物源性食品具有基质复杂、干扰物多、难以                          Waters Oasis MCX 固相萃取小柱(60 mg,3 mL)、
            分离提纯等问题。因此,高效准确的前处理是进行                             Waters Oasis HLB 固相萃取小柱(500 mg,6 mL),
            后续检测的关键        [17] 。国内外现有文献报道关于氯丙                 美国 Waters 公司;Agela Cleanert PCX  固相萃取小
            嗪等精神类药物的检测以尿液、血样或单一基质为                             柱(60 mg,3 mL),天津博纳艾杰尔科技有限公司。
            主,以动物源性食品基质为对象的报道较少,并且                             1.2    方法
            主要是以一种前处理方法进行基质的前处理。现有                             1.2.1    样品制备
                                                                   新鲜猪肉、鸡肉、鱼肉、猪肝去皮去骨,分别
            报道的前处理方法种类多,应用于质谱检测结果各
                                                               切成小块后打碎,均质混匀,装入聚乙烯瓶中,于
            有差异,缺乏系统对比。动物源性食品兽药残留检
                                                               18  ℃冷冻保存,测定前解冻、称样。
            测的前处理有多种方法,如固相萃取(Solid  phase
            extraction,SPE)法 [18-19] 、叔丁基甲醚直接提取法       [20-21]  1.2.2    标准溶液的配制
                                                                   将盐酸氯丙嗪标准品按纯度折算后精密称取
            等,用于去除基质干扰和净化目标化合物,从而提
                                                               10 mg,置 100 mL 量瓶中,加甲醇适量溶解并定容
            高检测灵敏度。MCX 固相萃取柱的填料是一种混合
                                                               至刻度,摇匀,作为标准品储备液(质量浓度为
            型强阳离子交换吸附剂,能够有效去除基质中的干
                                                               100 mg/L)。置于20  ℃冰箱中保存,有效期为 1 个
            扰。近年来 , QuECHERS ( Quick,  Easy,  Cheap,
                                                               月,实验中根据具体需求把储备液稀释成不同浓度
            Effective, Rugged and Safe)法由于高效、快速等优
                                                               的标准溶液,现用现配。
            势逐渐由农残检测应用于兽药残留检测                   [22-23] 。
                                                               1.2.3   QuECHERS 法
                 中国是肉类生产和消费大国,建立可靠便捷的
                                                                   参考标准 SN/T  3235—2012《出口动物源食品
            兽药残留检测方法是保证肉品安全的重要保障。本
                                                               中多类禁用药物残留量检测方法液相色谱-质谱法》
            文以猪肉、猪肝、鸡肉、鱼肉 4 种复杂基质为研究
                                                               进行检测。
            对象,结合 UPLC-MS/MS 技术,比较了 QuECHERS
                                                                   QuEChERS 吸附剂制备:准确称取 N-丙基乙二
            法、MCX 固相萃取法和叔丁基甲醚直接提取法 3 种
                                                               胺吸附剂(PSA)100  mg、十八烷基键合硅胶吸附
            前处理方法对氯丙嗪残留的检测效果,以期为氯丙
                                                               剂(C 18 )50 mg、无水硫酸镁 400 mg、石墨化碳黑
            嗪等兽药残留检测技术提供理论支撑和参考。
                                                               吸附剂(GCB)20  mg,储存于 25  mL 螺旋盖聚丙
            1    实验部分                                          烯离心管中,旋紧管盖,置于干燥箱内备用。
                                                                   提取:取样品 2 g 置于 50 mL 聚丙烯离心管中,
            1.1    材料、试剂与仪器                                    加入 8 mL 乙酸铵缓冲液,高速均质 0.5 min,加入
                 新鲜猪肉、鸡肉、猪肝、鱼肉,当地农贸市场。                         30  μL  β-葡糖苷醛甙酶-芳基硫酸酯酶,涡旋混合
                 盐酸氯丙嗪标准品( Chlorpromazine                      0.5 min,37  ℃振荡温育 12 h。然后静置至室温后,
            hydrochloride , CPZ, CAS#:69-09-0 ), 质量分 数         加入 15 mL V(氨水)∶V(乙腈)=1∶100 的溶液,
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