Page 99 - 精细化工2020年第2期

第 2 期 陈小强，等: 响应面法优化提取黄檗果实总酚和总黄酮及其抗氧化活性 ·301·

significantly correlated with the results of three kinds of antioxidant activities in vitro (P<0.01), indicating
that TP and TF may be the material basis of antioxidant activities of extracts of Phellodendron amurense fruit.
Key words: Phellodendron amurense fruit; total phenolics; total flavonoids; antioxidant activity;
correlation; modernization technology of traditional Chinese medicine

黄檗（Phellodendron amurense Rupr.）为芸香科 二盐酸盐（AAPH），美国 Sigma-Aldrich 公司；没
（Rutaceae）黄檗属（Phellodendron）植物，主产于 食子酸、芦丁、无水乙醇等其他试剂均为分析纯，
中国东北和华北各省。黄檗木材坚硬，木栓层是制 上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
造软木塞的材料，果实可作驱虫剂及染料，种子油 FW100 型高速万能粉碎机，天津市泰斯特仪器
[1]
可制肥皂和润滑油 。黄檗树皮内层经炮制后入药， 有限公司；FA114A 电子天平，上海奔普仪器科技
称为（关）黄柏，味苦，性寒，清热燥湿，泻火解 有限公司；JP-100ST 数控超声波清洗机，深圳市洁
毒，主治湿热痢疾、泄泻、黄疸、梦遗，以及口舌 盟清洗设备有限公司；H1650 医用离心机，湘仪离
生疮、目赤肿痛、痈疽疮毒、皮肤湿疹等症。黄柏 心机仪器有限公司；752N 紫外-可见分光光度计，
具有抗病原微生物、解热和抗炎、降压、兴奋心肌、 上海精科实业有限公司。
调节心率、抑制中枢神经、抗血小板聚集等多种药 1.2 方法
理学作用 [2-4] 。 1.2.1 黄檗果实总酚和总黄酮的提取
研究表明，黄檗含有多种生物碱类、柠檬苦素 将室温干燥至恒重的黄檗果实粉碎（过 20 目筛），
类、萜类、酚酸类、黄酮类化合物 [2,5-6] ，中药材黄 –20 ℃保存备用。称取一定量黄檗果实粉末，加入
柏黄酮具有抗氧化、抗肿瘤、抗心血管疾病等多种 不同体积分数的乙醇溶液，在不同的功率、液固比、
生理活性，还可作为食用色素及功能性添加剂用于 pH 值、温度和时间下超声提取，离心（10000 r/min，
保健食品 [7-9] 。目前，国内外对黄檗总酚和总黄酮提 10 min）后收集上清液测定总酚和总黄酮。
取工艺及抗氧化活性方面报道较少，且主要报道集 1.2.2 没食子酸标准曲线的绘制与黄檗果实总酚的
中于中药材黄柏总黄酮 [9-10] ，还有学者进行了黄檗 测定
叶片中的总黄酮成分提取分离和对酪氨酸酶活性影 采用福林-酚法进行没食子酸（GA）标准曲线
响等研究 [11-13] 。黄檗果实（Phellodendron amurense 的绘制与黄檗果实总酚的测定 [14] 。以没食子酸质量
fruit）因应用基础研究较少而尚未得到有效利用， 浓度为横坐标（X）、吸光度为纵坐标（Y）绘制标
故对其中的总酚和总黄酮类成分进行探索性工作， 准曲线，没食子酸标准溶液在 0.025~0.40 g/L 内与
对于优化资源利用、提高经济效益均具有积极意义。 吸光度的线性关系良好，线性拟合方程为 Y=3.8981X+
2
本文采用超声辅助提取黄檗果实总酚和总黄 0.0753（R =0.9957）。根据没食子酸标准曲线计算提
取液中总酚含量。黄檗果实总酚以每克干样品中酚
酮，利用单因素分析，对超声功率、乙醇体积分数、
酸类化合物相当于没食子酸的质量表示（mg GA/g）。
液固比、pH 值、温度和时间等因素对黄檗果实总酚
所有样品均测定 3 次。
和总黄酮得率的影响进行了考察，应用响应面法优
1.2.3 芦丁标准曲线的绘制与黄檗果实总黄酮的测定
化提取方案，得到最佳的提取工艺参数，并对黄檗
采用 NaNO 2 -Al(NO 3 ) 3 比色法进行芦丁（RT）
果实提取物的体外抗氧化活性开展实验研究，以期
标准曲线的绘制与黄檗果实总黄酮的测定 [15] 。以芦
为进一步综合开发利用黄檗资源提供理论依据。
丁质量浓度为横坐标（X）、吸光度为纵坐标（Y）
1 实验部分 绘制标准曲线，芦丁标准溶液在 0.03~0.30 g/L 内与
吸光度的线性关系良好，线性拟合方程为 Y=3.1165X–
1.1 材料、试剂与仪器 0.0117（R =0.9964）。根据芦丁标准曲线计算提取液
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黄檗果实于 2018 年 10 月采集于黑龙江省哈尔 中总黄酮含量。黄檗果实总黄酮以每克干样品中黄
滨市，由东北林业大学森林植物生态学教育部重点 酮类化合物相当于芦丁的质量表示（mg RT/g）。所
实验 室鉴定为芸 香科植物黄 檗（ Phellodendron 有样品均测定 3 次。
amurense Rupr.）的果实；超纯水，实验室自制；2,2- 1.2.4 单因素实验
二（4-叔辛基苯基）-1-苦肼基自由基（DPPH•）、奎 在一定条件下，分别考察超声功率、乙醇体积
诺二甲基丙烯酸酯（Trolox）、2,2′-联氮双（3-乙基 分数、液固比、提取温度、pH 值、提取时间对 TP
苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、2,4,6-三（2- 和 TF 得率的影响。参数考察范围分别为：功率 100、
吡啶基）三嗪（TPTZ）、2,2-偶氮二（2-甲基丙基咪） 200、300、400、500、600 W；乙醇体积分数 0、20%、