Page 138 - 《精细化工》2020年第4期

第 37 卷第 4 期 精 细 化 工 Vol.37, No.4
202 0 年 4 月 FINE CHEMICALS Apr. 2020

医药与日化原料
兼性离子修饰亲水磁珠固定化谷胱甘肽-S-

转硫酶 P1 及其表征

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杨林玉 ，同婷婷 ，李欣蓬 ，陈 童 ，廖 飞 ，杨晓兰
（1. 重庆医科大学 检验医学院，临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆 400016；2. 重庆理工大学 药
学与生物工程学院，重庆 401135）
摘要：谷胱甘肽-S-转硫酶 P1（Human glutathione-S-transferase π1，hGSTP1）为肿瘤耐药增敏药靶。为探索磁珠
固定化 hGSTP1 的合适方案用于磁分离指数富集从混合物中筛选高亲和力配体，重组表达 6×His-hGSTP1，分别
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用 Ni -NTA 琼脂糖和 GSH-Sepharose 4B 层析柱纯化，采用亲水兼性离子修饰的羧基磁珠和 Ni -NTA 磁珠固定
化 6×His-hGSTP1，表征其固定化容量、保留活性、稳定性以及对抑制剂响应性。羧基磁珠不能有效固定
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GSH-Sepharose 4B 层析柱纯化 hGSTP1，可有效固定 Ni -NTA 层析柱纯化 hGSTP1，但最大保留酶活仅约 30%。
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Ni -NTA 磁珠可有效固定两种方法纯化蛋白，其饱和固载容量约为羧基磁珠的 1.7 倍且最大保留酶活均可达
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80%。Ni -NTA 磁珠固定化 hGSTP1 在 pH 6.5 PBS 中 0 ℃振摇 8 h 活性未见明显改变，相同条件游离酶活性下
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降约 20%；在筛选后甲醇 80 ℃处理 20 min 不脱落。Ni -NTA 磁珠固定化 hGSTP1 和游离酶对抑制剂依他尼酸
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（Ethacrynic acid，EA）的 IC 50 无显著性差异（P>0.05）。因此，Ni -NTA 磁珠固定化 hGSTP1 可适用于指数富
集筛选混合物库中抑制剂。
关键词：谷胱甘肽-S-转硫酶；固定化；磁珠；混合物筛选；医药原料
中图分类号：O629.8 文献标识码：A 文章编号：1003-5214 (2020) 04-0772-07

Immobilization and characterization of glutathione-S-transthiase
P1 on zwitterion-coated hydrophilic magnetic beads

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YANG Linyu , TONG Tingting , LI Xinpeng , CHEN Tong , LIAO Fei , YANG Xiaolan
（1. Key Laboratory of Medical Laboratory Diagnostics of the Ministry of Education of China, College of Laboratory
Medicine, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China; 2. School of Pharmacy and Bioengineering,
Chongqing University of Technology, Chongqing 401135, China）
Abstract: Human glutathione-S-transferase Pi isozyme (hGSTP1) is a target to tackle resistance of tumor.
To explore an immobilization method suitable for affinity-drive-exponential-enrichment through magnetic
separation for the screening of high-affinity ligands of hGSTP1 from mixtures, immobilizations of hGSTP1
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on zwitterion-coated magnetic beads functionalized with Ni -NTA and carboxyl were compared. The
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recombinant expressions of 6×his-hGSTP1 were purified by Ni -NTA agarose column and GSH-
Sepharose 4B column, respectively. The immobilization capacity, retention activity, stability and response
of immobilized hGSTP1 to inhibitor were characterized. Carboxyl-functionalized magnetic beads showed
undetectable immobilization of hGSTP1 purified with GSH-Sepharose 4B column and exhibited certain
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immobilization of hGSTP1 purified with Ni -NTA agarose column, yielding about 30% retention activity
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of the free hGSTP1. While Ni -NTA magnetic beads could effectively immobilize hGSTP1 purified with
both columns, with a retention activity of about 80%, and its saturation immobilization capacity was
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1.7 times that of carboxyl-functionalized magnetic beads. The immobilized hGSTP1 by Ni -NTA magnetic

收稿日期：2019-09-12; 定用日期：2019-12-13; DOI: 10.13550/j.jxhg.20190865
基金项目：国家自然科学基金（31570862，81773625）
作者简介：杨林玉（1994—），女，硕士生，E-mail：yanglinyu_abc@163.com。联系人：杨晓兰（1968—），女，教授，E-mail：
xiaolanyang666@yeah.net。