Page 167 - 《精细化工》2020年第7期

第 7 期 王一彤，等: 香根草精油微胶囊的制备及其体外抗炎作用 ·1449·

表 1 正交实验因素水平 1.5 香根草精油微胶囊的体外释放研究
Table 1 Factors and levels of orthogonal experiments 使用透析方法进行了体外释放研究。将透析袋
因素 （截留相对分子质量：8000~10000）浸入蒸馏水中
水平
A m(明胶)∶m(壳聚糖) B 壁材用量/g C 精油用量/g 以除去防腐剂，并用 pH 为 7.4 的磷酸盐缓冲溶液
1 30∶1 0.5 0.1 （PBS）冲洗。将载有精油的微胶囊重新分散在 3 mL
2 30∶2 1.0 0.2 PBS 中，装入透析袋中，用 50 mL 含体积分数 20%
3 30∶3 1.5 0.3 乙醇、pH 1.5 和 7.4 的 PBS 包围。在 0~72 h 进行了
时间依赖性释放研究。将所有组在 37 ℃、100 r/min
1.3.3 微胶囊封装效果的测定 下孵育。在给定的时间间隔内，将 3 mL PBS 移出并
微胶囊封装效果由产率和封装率来衡量。产率 替换为新鲜的溶液，于 314 nm 下测定吸光度，计算
定义为制备的微胶囊占囊芯和壁材总质量的比率 [20] 。 香根草精油含量。释放率计算公式如下所示：
封装率定义为封装的香根草精油质量占封装过程中 释放率 /% = m t / m  100 （3）
m
添加的香根草精油总质量的百分比。使用从报道的 式中：m t 为释放精油的质量，g；m m 为封装的香根
文献中修改的溶剂萃取法测量微胶囊中包封的香根 草精油质量，g。
草精油 [21-22] 。将 2 g 微胶囊溶于 15 mL 蒸馏水中， 1.6 细胞实验
加入 15 mL 正己烷并充分混合后置于 65 ℃水浴中 1.6.1 细胞毒性测定
加热，萃取被封装的香根草精油。20 min 后冷却至 通过 MTT 比色法 [23] 测定细胞毒性。将完全培养
4
室温，以 4000 r/min 离心 20 min 以使壁材沉淀分离。 基中的 RAW264.7 细胞（2×10 个细胞/孔）接种到
在 314 nm 下测量吸光度来定量上层正己烷溶液中 96 孔细胞培养板中；不同浓度的香根草精油微胶囊
香根草精油的含量。以不同质量浓度的正己烷中香 （60~120 mg/L）加入孔中，置于 37 ℃温育 24 h。
根草精油的标准曲线计算香根草精油的含量。 除去含有香根草精油微胶囊的培养基，并将 MTT

/% 产率 m a /(m  b m c ) 100 （1） （0.5 g/L）溶液加入到每个孔中。在 37 ℃温育 4 h
后，除去 MTT 溶液，并将蓝紫色结晶甲臜溶于二甲
封装率 / %  m m / m  b 100 （2）
式中：m a 为微胶囊质量，g；m b 为加入的香根草精 基亚砜溶剂中，得到有色溶液。使用 ELISA 酶标仪
在 490 nm 下测量甲臜溶液的吸光度。细胞存活率计
油质量，g；m c 为加入的壁材质量，g；m m 为封装的
算公式如下所示：
香根草精油质量，g，按上式计算，香根草精油微胶
囊的封装率为 90.96%。 细胞存活率 /%  (A  01 A 00 ) /(A  02 A 00 ) 100 （4）
式中：A 00 为空白孔 OD 值；A 01 为实验组 OD 值；
1.4 香根草精油微胶囊的表征
A 02 为对照组 OD 值。
1.4.1 扫描电子显微镜的表征
1.6.2 体外抗炎活性测定
采用扫描电子显微镜观察香根草精油微胶囊的
RAW 264.7 细胞保存于含有体积分数 10%胎牛
形态结构。将香根草精油微胶囊加入到适量蒸馏水
血清和体积分数 1%抗生素/抗真菌药的完全 DEME
中，在超声波振荡器上使之均匀混合，将混悬液滴
4
培养基中 [24] 。将细胞（5×10 细胞/孔）接种到 96 孔
加到制样台上，过夜风干，最后真空镀金后进行观
培养板中。用不同浓度的香根草精油微胶囊预处理
察，拍照。
细胞 18 h，然后在不存在或存在脂多糖（LPS，
1.4.2 粒径和电位的测定
1 mg/L）的情况下温育 18 h。根据制造商的说明，
通过粒度仪和 Zeta 电位仪测定微胶囊的流体动
使用小鼠 IL-1β、IL-6 和 TNF-α ELISA 试剂盒，测
力学尺寸和 Zeta 电位。
定释放到培养上清液中的 IL-1β、IL-6 和 TNF-α。将
1.4.3 傅里叶变换红外光谱测定
标准品和样品加入到涂有捕获抗体的孔板上，于
通过 FTIR 分析了香根草精油与壁材（明胶和
4 ℃孵育过夜。将检测抗体温育 1 h，并加入抗生物
壳聚糖）的分子间相互作用。将香根草精油微胶囊
素蛋白-HRP 以结合检测抗体。向每个孔中加入底物
与空白微胶囊分别在玛瑙乳钵中与溴化钾混合研磨
溶液后，通过终止溶液（1 mol/L H 2 SO 4 ）终止反应。
2
20~30 s。在真空条件下，以 8000 kPa/cm 压制溴化
实验以抑制炎性因子 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 的释放
钾片，将压片放入机器样品光路中，用检测仪在
作为评价抗炎活性的指标。
–1
500~4000 cm 的范围内扫描香根草精油、香根草精 1.7 数据统计分析
油微胶囊与空白微胶囊的 FTIR 光谱。对于每个光 实验中的数据显示为平均值±标准差（ x ±SD），
–1
谱均以 4 cm 的分辨率连续扫描 32 次。 并使用 SPSS 22.0 软件进行单因素方差分析（one-