Page 173 - 《精细化工》2020年第7期
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第 7 期                  张冬梅，等:  多巴胺--环糊精/α-生育酚的分子识别及包结物性能                               ·1455·


            疾病防控具有重要意义。                                        1 HNMR(400 MHz,  DMSO-d 6 ),  δ: 7.71(d, 3H), 6.63(s,
                 环糊精（CDs）是重要的生物医用分子，具有                         2H), 4.85(m, 14H), 4.13 ~ 3.70(m, 28H), 2.97(m, 1H),
                                                               1.72(m, 4H)。HRMS (ESI,  m/Z)：计算值 1306.4202
            疏水空腔，能够通过主-客体作用对各种无机、有机
                                                                                               +
                                                                     +
                                                               [M+K] ，实测值，1306.4212 [M+K] 。
            及生物分子进行主动识别，在构建不同性质和不同
            形态的智能药物传输体方面具有广泛应用                     [9-11] 。环   1.2.2   主客体包结物的制备
                                                                   取 8 份 5 mL，12.5 mmol/L（62.5 μmol）的 α-TOC
            糊精的常见类型 β-环糊精（β-CD）在 α-TOC 的分子
            识别及空腔匹配性方面表现出一定的优势                    [12-13] 。但   乙醇溶液，配制主体分子（β-CD 或 -CD-6-DA）与
                                                               客体分子 α-TOC 物质的量比分别为 5∶1、4∶1、3∶
            是 β-CD 较差的水溶性以及对 α-TOC 较低的空腔主
                                                               1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4 的包结物溶液。
            客体包结比（主体分子与客体分子的物质的量比）
            大大降低了包结物的有效利用率               [14] 。为了提高药物          α-TOC 乙醇溶液在搅拌下逐滴加入到主体分子中，
                                                               随后超声 30 min，置于 4  ℃冰箱中过夜，次日使用
            负载率，研究者们主要采用酯化、氧化、醚化、交
            联等化学改性方式改善 β-CD 的溶解性                [15-16] ，进而    冷的二氯甲烷萃取未包结的 α-TOC，保留上层液体，
                                                               并对其冷冻干燥，分别得到白色和棕色的固体，即
            增加其对客体分子的包封率。然而，这些方式并没
                                                               为不同物质的量比的主客体包结物 β-CD/ α-TOC 或
            有从改善主-客体包结比的角度出发在本质上提升
                                                               -CD-6-DA/α-TOC。
            对 α-TOC 的包封率和载药量，同时也缺失刺激响应
                                                               1.2.3   主客体包结物的包封率和载药量测定
            性可控释放和协同的抗氧化能力。
                                                                   α-TOC 标准曲线绘制：绘制 α-TOC 质量浓度ρ
                 为了提升 α-TOC 在环境中的稳定性，增强其包
                                                               与吸光度A 的标准曲线，并求得回归方程ρ=102.51A+8.17，
            封率及药物利用率，本研究采用含酚抗氧化活性物
                                                                        2
                                                               相关系数 R =0.997。
            种多巴胺（DA）改性 β-CD，得到包结物主体分子。
                                                                   将 1.2.2 节所制备的不同物质的量比的包结物
            然后应用该主体分子通过主-客体作用对 α-TOC 进
                                                               样品分别配制成 5 mL，48 mg/L 的水溶液样品，并
            行分子识别，并研究其药物包封率、包结行为和主-
                                                               在 291 nm 处测试吸光度 A，根据回归方程推算包结
            客体包结比。进一步地，对主-客体包结物的生物相
                                                               物中 α-TOC 的质量 m 1 。包封率（ER）和载药量（LD）
            容性、智能响应性释放以及协同的抗氧化能力进行
            深入探讨。该研究以期为以 α-TOC 为药物智能载体                         按以下公式计算：
            的构建提供指导，在医药及日化领域具有潜在的应                                           ER/%=(m 1 /m)×100           （1）
            用价值。                                                             LD/%=(m 1 /M)×100          （2）
                                                               式中：m 1 表示主客体包结物中通过回归方程计算的
            1    实验部分                                          α-TOC 的质量，μg；m 表示制备主客体包结物时 α-TOC

                                                               加入的质量，μg；M 表示主客体包结物的总质量，μg。
            1.1    试剂与仪器
                                                               1.2.4   主客体包结物的包结比
                 对甲苯磺酰氯、-CD、盐酸多巴胺（DA·HCl）、
                                                                   按照 1.2.2 节方法制备不同物质的量比的包结
            α-TOC、2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵
                                                               物样品溶液，并在 291 nm 处测试不同物质的量比下
            盐（ABTS）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、
                                                                                                        2
                                                               的吸光度 A，制作 1/A 与 1/c([H])或 1/c([H]) 工作
            DMSO-d 6 ，以上试剂均为分析纯，阿拉丁试剂公司；
                                                               曲线，根据 Benesi-Hildebrand 方程（见式 3）计算包
            高糖 DMEM、青链霉素，美国 Gibco 公司；四季青
                                                               结物的包结比和包结常数。
            胎牛血清，浙江天杭生物科技股份有限公司；细胞
                                                                                               n
                                                                         1/A=1/+1/  〔K c([H]) 〕      （3）
            增殖毒性试剂盒（CCK-8），碧云天生物技术研究所；
            生物试剂均为医药级。                                         式中：A 表示加入主体分子后紫外吸光度较无主体
                 600 MHz 核磁共振波谱仪，美国 Bruker 公司；                 分子时吸光度的差值， 为摩尔吸光系数差，K 为
            3900 紫外可见光谱仪，日本 Hitachi 公司；SpectraMax              包结常数，即工作曲线的斜率，c([H])表示包结物主
            M5 酶标仪，美国 Molecular Devices 公司；LGJ-10              体分子的浓度，n 表示主体分子与客体分子的物质
            冷冻干燥机，北京松源华兴科技发展有限公司。                              的量比，即主客体包结比。根据工作曲线判定包结
            1.2    制备                                          比，当 1/A 与 1/c([H])的工作曲线为直线时，主客
                                                                                                 2
            1.2.1   单-（6-DA-6-去氧）-β-环糊精（β-CD-6-DA）             体包结比为 1∶1，当 1/A 与 1/c([H]) 的工作曲线
                   的合成                                         为直线时，主客体包结比为 2∶1。
                 β-CD-6-DA 的制备过程参照文献[17]方法，不                   1.2.5   主客体包结物的温度响应性释放
            同之处为，在反应过程中使用氩气排赶空气，直到反                                将 1.2.2 节制备的主客体物质的量比 1∶1 包结物样
            应结束为止。 β-CD-6-DA 的产 率为 53.9% 。                     品配制为 48 mg/L 的储备液，采用变温紫外光谱仪分
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