Page 174 - 《精细化工》2020年第7期

·1456· 精细化工 FINE CHEMICALS
别在 291 nm 处连续地测试 20、25、30、35、40 和
60 ℃的吸光度 A，每个温度点保温 10 min，并绘制
包结物样品随温度变化的平均吸光度曲线。同时，在
每个温度点每 5 min 采集一个 A 值，并连续采样 30
min，绘制不同温度下 α-TOC 累积释放量随释放时间
变化的曲线。累积释放量计算公式见式（4）：
累积释放量/%=〔(A 0 –A 1 )/A 0 〕×100 （4）
式中：A 0 表示 20 ℃包结物的吸光度；A 1 表示其他
温度下包结物的吸光度。
1.2.6 细胞毒性实验
正常小鼠胚胎成纤维细胞（NIH-3T3）由北京
协和医院引入。细胞培养基为体积分数分别为 10%
的胎牛血清，1%的青链霉素和 89%的高糖 DMEM。
配制样品储备液，使用细胞培养基配制质量浓度分
别为 50、100、200、500、800、1000 mg/L 的 -CD-6-
DA、-CD/α-TOC 和 -CD-6-DA/α-TOC（主客体物
质的量比为 1∶1 的包结物）储备液。细胞培养程序
3
为：首先将 5×10 个/孔 NIH-3T3 接种于 96 孔板中，
加入 100 μL 的细胞培养基，于孵箱（37 ℃/体积分
数 5% CO 2 ）中培养 24 h，随后弃去培养基并使用
PBS 缓冲液冲洗两遍，然后分别加入 100 μL 储备液
样品，继续孵育 24 h。每个样品 6 个复孔，正常培
养基孵育的细胞作为控制组，储备液孵育的细胞作
为样品组。待孵育结束后，弃去培养基，PBS 缓冲液
冲洗 2 遍，每孔中加入 100 μL 培养基配制的体积分数
为 10%CCK-8 试剂，继续孵育 1 h 后，立即使用酶
标仪测试 450 nm 处的吸光度，并记录数值。细胞活
性的计算公式见式（5）：
细胞活性/%=〔(A–A w )/(A n –A w )〕×100 （5）
式中：A 表示使用样品孵育细胞后的吸光度；A w 表
示没有细胞时孔板的吸光度；A n 表示正常细胞的吸
光度。
1.2.7 主客体包结物的体外抗氧化能力
-CD-6-DA 和主客体包结物样品（主客体物质的
量比为 1∶1）对 DPPH 自由基（DPPH•）清除活性的
测定参照文献[12]。分别配制质量浓度为 0.05 ~ 2.00 g/L
的 α-TOC、维生素 C（V C ）、-CD-6-DA、-CD/α-TOC
和 -CD-6-DA/α-TOC 储备液。配制浓度为 0.50 mmol/L
的 DPPH•溶液，现配现用。随后分别将 100 μL 的储
备液样品与 200 μL 的 DPPH•溶液混合均匀，室温避
光反应 30 min。立即使用酶标仪检测 517 nm 处的吸
光度，并记录数值。DPPH•清除率计算公式见式（6）：
DPPH•清除率/%=〔1–(A s –A c )/A b 〕×100 （6）
式中：A s 表示与自由基反应后样品的吸光度；A c 表
示储备液自身的吸光度；A b 表示自由基自身的吸光度。
+
样品对 ABTS 自由基（ABTS •）的清除活性测定
参照文献[18]。配制质量浓度为 0.05 ~ 2.00 g/L 的
第 37 卷
-CD-6-DA、-CD/α-TOC 和 -CD-6-DA /α-TOC 储
备液。分别配制 7.4 mmol/L（10 mL）的 ABTS 和
2.6 mmol/L（4 mL）的过硫酸钾水溶液，均匀混合
反应 12 h，作为工作液。随后分别取 100 μL 工作液
与 20 μL 储备样品溶液混合均匀，37 ℃反应 6 min。
立即使用酶标仪检测 734 nm 处的吸光度，并记录数
+
值。ABTS •清除率计算公式见式（7）：
+
ABTS •清除率/%=〔1–(A s –A c )/A b 〕×100 （7）
式中：A s 表示与自由基反应后样品的吸光度；A c 表示
储备液自身的吸光度；A b 表示自由基自身的吸光度。
2 结果与讨论
2.1 主客体包结物的包封率和载药量
包结物主体分子对客体分子 α-TOC 的包封率
（ER）和载药量（LD）结果见表 1。表 1 中，当两
个包结物主体分子与客体分子的物质的量比相同
时，-CD-6-DA/α-TOC 对 α-TOC 的包封率（ER）
均远高于 β-CD/α-TOC 包结物，且主体分子的投料
比越大，包封率越高。当 n（主体）∶n（客体）=5∶
1 时，-CD-6-DA/α-TOC 对 α-TOC 的包封率高达
99.3%，而 -CD/α-TOC 包结物仅为 46.3%。尽管载药
量（LD）在加大主体分子的投料比后呈现下降趋势，
但 -CD-6-DA/α-TOC 的载药量在不同物质的量比下
均远高于 β-CD/α-TOC 。这些结 果可能归 因于
-CD-6-DA 衍生物一方面改善了 -CD 的水溶性，提
高了对 α-TOC 的分子识别能力。另一方面 -CD-6-DA
拓展了 -CD 的空腔深度，改变了主客体包结比，这
将在下文中深入讨论。所以，-CD-6-DA 的疏水空
腔极大地提高了对 α-TOC 的包封率和载药量。
表 1 包结物主体分子对客体分子 α-TOC 的包封率（ER）
和载药量（LD）
Table 1 Encapsulation rate (ER) and drug-loading content
(LD) of inclusion complex host molecules on
guest molecule α-TOC
β-CD/α-TOC -CD-6-DA/α-TOC
n(主体)∶n(客体)
ER/% LD/% ER/% LD/%
5∶1 46.3±0.2 3.3±0.2 99.3±0.7 6.3±0.4
4∶1 38.8±0.6 3.4±0.1 94.8±0.7 9.2±0.3
3∶1 32.4±0.3 3.6±0.3 84.3±0.6 10.0±0.2
2∶1 28.6±0.6 4.5±0.5 79.4±0.9 12.1±0.1
1∶1 15.7±1.2 4.3±0.2 42.6±0.4 12.6±0.8
1∶2 12.3±0.5 5.3±0.3 33.2±0.9 16.8±0.7
1∶3 10.7±0.3 5.7±0.4 30.1±1.3 21.1±0.6
1∶4 10.8±0.6 6.5±0.6 26.4±0.9 23.8±0.5
2.2 主客体分子识别行为及包结比
将 β-CD/α-TOC 和 -CD-6-DA/α-TOC 包结物样