Page 135 - 《精细化工》2021年第7期
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第 7 期                    周   萍，等:  黑豆皮花色苷的酶法酰化制备及其稳定性分析                                 ·1417·


            围，提高其生物利用率，研究者采用不同的酰基供                             可见分光光度计，美国 Thermo Fisher Scientific 公
            体对花色苷进行酰化，在保留花色苷抗氧化性和稳                             司；WH-B04 型 LED 白炽灯（功率 50 W），广州雪
            定性的前提下，提高其脂溶性与生物相容性                     [18-20] 。   航照明有限公司。
                 目前，关于酰化花色苷的合成主要为化学合成                          1.2   方法
            和酶法酰化。化学合成法具有专一性较差、产物复                             1.2.1   技术路线
            杂、产率低的特点。酶法酰化研究的不足之处在于
            反应均采用花色苷标准品（纯度要求 98%以上）进
            行酰化，因此，要求首先对花色苷进行纯化处理。
            因此，酶法酰化具有工艺繁琐、设备要求高、成本
            耗费大、难以适应工业化生产。此外，对酰化产物
            的分离纯化一般采用制备型高效液相色谱进行分
            离，不仅对设备要求高，且效率低，也不适合实际
            生产  [21-22] 。另一方面，为了使其有更广的应用范围，
            需要进一步研究不同因素对产物稳定性的影响。
                 本文以工业化应用为目的，建立了一种花色苷
            高效酰化和分离的方法，制备 C3G 与月桂酸（La）

            酰化产物矢车菊素-3-O-葡萄糖苷月桂酸酰化物                               图 1  C3G-La 制备及稳定性研究方案及技术路线
            （C3G-La），并探讨 C3G-La 在 pH 为 1~13 范围，                Fig. 1    Technical route of preparation and stability test of C3G-La
            在光照和避光条件下的储存稳定性。该文可为油溶
                                                               1.2.2  C3G 的纯化
            性花色苷的工业化生产提供借鉴，为花色苷酰化产
                                                                   向 3.0 g 黑豆皮提取物中加入 30 mL 体积分数为
            物的应用提供理论数据与参考，扩大花色苷的应用
                                                               70%乙醇水溶液，其料液比（g∶mL）为 1∶10，超声
            范围，同时对农作物废料的高值化利用提供新思路。
                                                                                                       5
                                                               波功率 500 W 辅助提取 10 min，于 4 ℃下 1.010 r/min
            1   实验部分                                           离心 20 min，收集上层提取液，重复提取 3 次。用
                                                               0.45 μm 有机系滤膜（尼龙）将提取液负压抽滤，并
            1.1    试剂与仪器                                       收集滤液，减压蒸馏除去溶剂，加入 5 mL 去离子水
                 黑豆皮提取物（C3G 质量分数 35.8%），北京绿                    使花色苷充分溶解。Sephadex LH-20 以去离子水浸
            色金可生物技术股份有限公司；C3G 标准品（质量                           泡，静置过夜，装于玻璃层析柱（4 mm×457 mm×60
            分数 95%）、La（分析纯）、4Å 分子筛、甲醇（色谱                       mm）中，体积约为 800 mL。取花色苷溶液上样，
            级），萨恩化学技术（上海）有限公司；诺维信脂肪                            依次用 1500 mL 去离子水，1500 mL 体积分数为 10%
            酶（Novozyme 435），成都建荃科技有限公司；乙腈                      乙醇水溶液，2000 mL 体积分数为 20%乙醇水溶液
            （色谱级），美国 Mallinckrodt Baker 公司；甲酸（色                进行洗脱，用 TLC 点板监测洗脱馏分，展开剂为
            谱级），天津市科密欧化学试剂有限公司；叔丁醇、                            V(正丁醇)∶V(甲酸)∶V(水)=4∶1∶1 的混合液，收
            二甲基亚砜（DMSO）、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、                       集体积分数为 20%乙醇水溶液洗脱馏分，减压蒸馏，
            氯化钠、碳酸氢钠，天津市大茂化学试剂厂；乙酸                             浓缩至干后收集 C3G 粉末。
            乙酯、甲醇、甲酸、二氯甲烷、石油醚（60~90 ℃），                        1.2.3  C3G-La 的制备
            分析纯，广州化学试剂厂；柱层析硅胶（精制型，                                 将 4Å 分子筛于 150 ℃下干燥 24 h 活化备用。
            200~300 目），青岛海洋化工有限公司；液相用水，                        按固液比（g∶mL）为 1∶10 在叔丁醇中加入活化
            华润怡宝食品饮料（深圳）有限公司；葡聚糖凝胶                             的 4Å 分子筛，静置过夜，去除水分备用                 [18] 。取纯
            Sephadex LH-20，法国 Extrasynthese 公司。                化后花色苷（C3G 质量分数 80%）、花色苷标准品
                 FE22 pH 计，梅特勒-托利多仪器（上海）有限                     （C3G 质量分数 95%）、黑豆皮提取物（C3G 质量
            公司；N-1100 型旋转蒸发仪，上海爱朗仪器有限公                         分数 35.8%）于 50 mL 磨砂口圆底烧瓶中，溶剂按
            司；KQ-500D 型台式数控超声波清洗器，东莞市科                         表 1 比例配制，其他试剂配比为 n(C3G)∶n(La)=1∶
            桥超声波设备有限公司；LC-20AT 高效液相色谱仪、                        10，分子筛与溶剂的固液比（g∶mL）为 1∶10，
            LCMS-8045 高效液相色谱-质谱联用仪，日本 Shimadzu                 Novozyme 435 与溶剂的固液比（g∶L）为 10∶1，
            公司；600 MHz  AvanceⅢ核磁共振波谱仪，瑞士                      采用冷凝回流装置，在 60 ℃下反应 72 h。在酰化反
            Bruker 公司；Infinite M200 PRO 光栅型多功能微孔               应期间，用 TLC 进行监测，展开剂为 V(二氯甲烷)∶
            板检测仪，瑞士 Tecan 公司；GENESYS 10S 紫外-                   V(甲醇)∶V(甲酸)=7∶1∶1。
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