Page 149 - 《精细化工》2021年第7期

第 7 期 任丹丹，等: 血小板膜伪装介孔聚多巴胺纳米药物传递系统的制备及应用 ·1431·

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战，包括耐药性和严重副作用 。基于药物纳米载 培养基、磷酸盐缓冲液（PBS）、胰蛋白酶和胎牛血
体和亚微载体的药物传递系统已受到人们的广泛关 清，美国 Gibco 公司；3-(4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-
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注 。但这些载体材料大多生物安全性较低，难以 二苯基四氮唑溴盐（MTT）和蛋白酶抑制剂，美国
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在体内降解代谢，且可能对生物体有一定毒性 。 Sigma 公司；大鼠外周血血小板提取试剂盒，天津灏洋
通常需要复杂的表面修饰，制备过程繁琐且可能对 生物科技有限公司；人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）、
载药系统产生负面影响。因此，寻找一种生物相容 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和巨噬细胞（RAW264.7），
性好的材料是十分必要的。 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所；雄性 SD
聚多巴胺（PDA）由于具有优异的生物安全性 大鼠（清洁级），上海斯莱克实验动物有限责任公司；
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而引起广泛关注 。多巴胺是一种儿茶酚胺，在人 所有动物实验均经过严格的伦理审查，并按照云南
体中广泛分布，多巴胺在碱性条件下通过氧聚合作 中医药大学实验动物福利与伦理委员会授权的程序
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用自组装成 PDA 。自 2007 年，LEE 等 由贻贝得 进行。所用药品均为 AR。所用水均为超纯水。
到启发首次制备出 PDA 涂层后，人们开始利用 PDA 1.2 仪器
涂层减少材料的毒性和其他副作用。近年来，很多 JEM-2100 型透射电子显微镜，日本 JEOL 公司；
研究中以 PDA 纳米粒子作为药物递送载体，进一步 UV3600 型紫外-可见分光光度计，日本岛津公司；
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提升了材料的生物相容性 。最近有研究报道，以 MK3 型酶标仪，普朗医疗器械公司；BI-200SM 型
三甲基苯作为模板可以使多孔配位聚合物层在 PDA 动态光散射仪，美国 Brookhaven 公司；FV1000 型
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纳米球表面形成，使其具有多孔结构 ，介孔 PDA 共聚焦激光扫描显微镜，日本奥林巴斯公司。
材料（MPDA）提供了更灵活的结构，具有大比表 1.3 方法
面积和高孔体积的优势。 1.3.1 MPDA 的制备
近年来，细胞膜仿生纳米载体系统引起人们极 采用一锅法制备 MPDA 纳米粒子。 首先，将 1.0 g
大关注。血小板是一种常见的血液细胞，基于血小 F127 和 0.5 g 盐酸多巴胺溶于 10 mL 水和无水乙醇
板膜（PLTM）上的 CD47 免疫调节蛋白释放“不要 （体积比 1∶1）混合液中，并超声辅助溶解。将混
吃我”的信号，避免了巨噬细胞的吞噬，经 PLTM 合液缓慢加入装有 80 mL 水和无水乙醇（体积比 1∶
仿生伪装的纳米颗粒可以避免药物过早释放，并且 1）混合液的圆底烧瓶中，室温下 1000 r/min 磁力搅
可以降低体系的免疫原性，从而延长血液循环周期， 拌 3 h 后，缓慢滴加 1.5 mL TMB，将混合物超声溶
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进一步提高生物相容性 ，并且 PLTM 表面的 P 选 解，继续搅拌 30 min，加入 5 mL 氨水进行模板去
择素能够特异性结合癌细胞表面的 CD44 受体，进 除，继续搅拌 3 h。反应结束后，收集产物。为了纯
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而赋予 PLTM 仿生的载体主动靶向进攻肿瘤的作用 。 化产物，将混合物与无水乙醇等体积混合，超声处理
3 次（每次 30 min），并通过离心（13000 r/min，10 min）
基于以上研究，本文拟制备一种智能纳米药物
传递系统，用三甲基苯（TMB）作为有机模板在乙 分离。将得到的样品于–45 ℃冷冻干燥 48 h 后，得
醇中制备 MPDA 层。多巴胺在有氧环境中自聚合形 到 MPDA 纳米粒子，储存备用。
1.3.2 DOX@MPDA 的制备
成 PDA，MPDA 的介孔结构形成的关键因素是 PDA
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结构与 TMB 分子之间的 π-π 堆积相互作用 。利用物 取 0.3 g 上述 MPDA 溶于 10 mL 磷酸盐缓冲液
（PBS）中，再取 0.1 g DOX 溶于 50 μL DMSO 中，
理吸附成功负载盐酸阿霉素（DOX），最后通过
将溶解后的 DOX 溶液快速加入到 MPDA 溶液中。室
PLTM 包裹成功构建了血小板仿生伪装的纳米药物
温避光 300 r/min 搅拌 24 h 后，13000 r/min 离心分离
传递系统 PLTM-DOX@MPDA，期望通过以上安全
上清液备用，将纯化后产物收集并溶于 10 mL PBS 中
简便的方法成功制备出生物相容性高、生物毒性低、
得到质量浓度为 30 g/L 的 DOX@MPDA 溶液，4 ℃
能够逃避巨噬细胞捕捉并具有主动靶向性的多功能
储存备用。
纳米药物传递系统。
1.3.3 PLTM-DOX@MPDA 的制备
1 实验部分 在大鼠心脏处取新鲜血液，然后使用血小板提
取试剂盒提取血小板，将血小板悬浮液反复冻融 3
1.1 材料 次，离心收集沉淀物转移至 10 mL 含有蛋白酶抑制
盐酸阿霉素（DOX）、盐酸多巴胺、Pluronic F127 剂和乙二胺四乙酸（EDTA）的 PBS 中进行超声（100
和三甲基苯（TMB），阿拉丁生化科技股份有限公司； W，5 min）处理，得到 PLTM 碎片的悬浮液。将 2 mL
无水乙醇、二甲基亚砜（DMSO）、氨水、丙酮、透 PBS 稀释后的 DOX@MPDA 溶液（2 g/L）与 5 mL
析袋等，国药集团化学试剂有限公司；DMEM 高糖 PLTM 碎片悬浮液混合，在 100 W 功率超声 5 min，最