Page 150 - 《精细化工》2021年第7期
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·1432·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 38 卷

                                                                     –1
            后使用孔径 200 nm 的滤膜挤压器反复挤压 30 次，                      500 cm 内进行扫描若干次，采集数据。
            制得 PLTM-DOX@MPDA。采用相同方法，不加                         1.4.3   比表面积与孔隙度测试（BET）
            DOX，制备无载药的 PLTM-MPDA 纳米粒子。                             取 200 mg 冷冻干燥得到的固体 MPDA 通过全
                                                               自动快速比表面积与孔隙度分析仪测定比表面积与

                                                               孔径。
                                                               1.4.4  UV-Vis 测试
                                                                   分别用 PBS 配制质量浓度为 50 mg/L 的 DOX、
                                                               MPDA、DOX@MPDA 溶液各 800 μL，80%功率超声
                                                               5 min 使其充分溶解，然后分别转移到比色皿中，检

                    图 1  PLTM-DOX@MPDA 制备示意图                   测样品于 200~1000 nm 内的吸收光谱。
            Fig. 1    Schematic diagram of preparation of PLTM-DOX@
                   MPDA                                        1.4.5   纳米粒度测试
                                                                   分别取 PBS 溶解的质量浓度为 0.5 g/L 的 DOX、

            1.3.4  DOX@MPDA 的载药性测定                             MPDA、DOX@MPDA、PLTM-DOX@MPDA 溶液各
                 用 PBS 分别配制质量浓度为 2.5、3.75、5、7.5、               2 mL，80%功率超声 10 min，然后分别转移到比色
            10 mg/L 的 DOX 溶液，用紫外-可见分光光度计在                      皿中，用纳米粒度分析仪检测不同样品的 Zeta 电位
            λ=490 nm 处测定溶液的吸光度值，并绘制 DOX 溶                      和粒径。
            液吸光度（y）-质量浓度（x）标准曲线（y= 0.173x+                     1.5  PLTM-DOX@MPDA 的体外细胞摄取
                     2
            0.0649，R = 0.9998）。                                    将 MDA-MB-231 细胞和 RAW264.7 细胞分别接
                 取 1 mL  1.3.2 节得到的上清液稀释至合适的质                  种于小培养皿中，并在 37 ℃、体积分数 5% CO 2 环
            量浓度，用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸光度                            境中培养 24 h。分别用加有 DOX、DOX@MPDA、
            值，再根据标准曲线计算出复合物中 DOX 的含量。                          PLTM-DOX@MPDA 和对照组 PBS 的无营养培养基
            并根据式（1、2）计算材料的载药率（LC）和包封                           培养 2 h，去掉培养基，用 PBS 洗涤两次。将细胞
            率（EE）。                                             用戊二醛溶液在 4 ℃下固定 15 min，去掉戊二醛溶
                         LC/%=(M 0 –M 1 )/m×100       （1）      液，PBS 洗涤两次，在黑暗中用 Hoechst33342（染
                         EE/%=(M 0 –M 1 )/M 0 ×100    （2）      色剂）染色 30 min，再用 PBS 洗涤两次，用共聚焦
            式中：M 0 为 DOX 的投药质量，M 1 为上清液中 DOX                   激光扫描显微镜（CLSM）记录图像。
            的质量，m 为 MPDA 纳米粒子的质量，单位均为 g。
                                                               1.6  PLTM-DOX@MPDA 的体外细胞毒性测定
            1.3.5  PLTM-DOX@MPDA 的释药性测定
                                                                   使用 MTT 法检测该纳米药物传递系统对癌细
                 将 2 mL PLTM-DOX@MPDA、DOX@MPDA 密
                                                               胞的杀伤作用。将 MDA-MB-231 细胞接种于 96 孔
            封在透析袋（截留相对分子质量 7000）中，然后浸
                                                               板并在 37 ℃、体积分数 5% CO 2 环境中培养 12 h。
            入装有 18 mL PBS（pH 7.4 或 5.0）的带塞大试管中。
                                                               将 PBS 溶解的 DOX、DOX@MPDA、PLTM- DOX@
            将试管置于摇床中以 100 r/min 摇动。在特定的时间
                                                               MPDA 溶液（含有终质量浓度为 1、2、3、4、5 和
            点（0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72、96 h），
                                                               6 mg/L DOX）和对照组 PBS 添加到每个孔的培养基
            取出 1 mL 外部 PBS，并补充 1 mL 相应 pH 的新鲜
                                                               中，并孵育持续 24 h。吸去药物溶液，每孔加入 20
            PBS，并用紫外-可见分光光度计测定溶液吸光度值，
                                                               μL MTT 溶液。37 ℃温育 4 h 后，吸去 MTT 溶液，
            根据 DOX 标准曲线方程计算出不同时间点释放的
                                                               每孔加入 100 μL DMSO，摇床缓慢摇动 15 min 后，
            DOX 量。所有实验均重复 3 次。
                                                               吸去 DMSO，在酶标仪上于 570 nm 下测量细胞吸光
            1.4    材料表征
                                                               密度（OD）值，并按式（3）计算细胞存活率：
            1.4.1  TEM 测试
                 用移液枪分别吸取少量质量浓度为 0.2 g/L 的                          细胞存活率/%=(OD 实验组–OD 空白组)/
            MPDA 和 PLTM-DOX@MPDA 水溶液，滴加到铜网                              (OD 对照组–OD 空白组)×100       （3）
            上，自然晾干，然后将制得的样品通过透射电子显                                 其中，空白组为不加任何物质时孔板自身 OD
            微镜进行测试。                                            值。
            1.4.2  FTIR 测试                                         同样采用 MTT 法检测该纳米药物传递系统的
                 通过 FTIR 测试 MPDA 的化学结构，分别滴加                    生物相容性。以质量浓度递增的 MPDA、PLTM-
            少量 MPDA 溶液至红外光谱仪的样品仓，在 4000~                       MPDA 及 PLTM-DOX@MPDA（质量浓度分别为 20、
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