Page 117 - 《精细化工》2022年第4期

第 4 期 赵 丹，等: 乳酸菌发酵提取物保护皮肤氧化损伤的作用与机理 ·753·

随着生活水平的日益提高，人们越来越注重对 上海碧云天生物技术有限公司；人皮肤成纤维细胞
皮肤的防护。紫外线暴露、机体衰老等外源性和内 （HSF），中国科学院细胞库；FM 培养基，美国康
源性因素均会导致自由基的产生，从而破坏皮肤细 宁公司；EasyScript One-Step gDNA Removal and
胞氧化平衡状态发生氧化损伤，加速皮肤衰老，产 cDNA Synthesis SuperMix 反转录试剂盒、
生皱纹、色斑、弹性下降等问题。抗氧化剂能够消 TransStart® Top Green qPCR SuperMix，北京全式金
除细胞内的活性氧（ROS）和自由基，减缓氧化应 技术股份有限公司。
激引起的皮肤细胞损伤 [1-2] 。因此，天然抗氧化剂的 UV mini-1240 型紫外-可见分光光度计，岛津企
开发逐渐成为近年来的研究热点。 业管理（中国）有限公司；WJ-80A-Ⅱ型 CO 2 恒温
乳酸菌是公认的最安全的食品级微生物，广泛 培养箱，上海圣科仪器设备有限公司；Olympus
用于食品饮料中，同时也是天然的抗氧化剂。研究 Ⅸ73 倒置显微镜，上海普赫光电科技有限公司；
发现，乳酸菌及其发酵产物可以降低机体内 ROS 的 TGL-16 冷冻高速离心机，湖南湘仪实验室仪器开发
累积量，维持人体 ROS 正常水平 [3-4] ，同时，乳酸 有限公司；Infinite M200 PRO 荧光酶标仪，瑞士
菌及其相关产物还能够提升抗氧化物酶活性，清除 Tecan 贸易有限公司；QuantStudio 3 实时荧光定量
机体过量自由基，维持氧化与抗氧化系统的平衡， PCR 仪，美国 Thermo Fisher Scientific 公司。
起到抵御氧化应激损伤的作用 [5-6] 。乳酸菌的抗氧化 1.2 方法
性成分包含乳酸菌菌体、乳酸菌溶胞物以及发酵上 1.2.1 发酵提取物的制备
[7]
清液，其中乳酸菌发酵上清液抗氧化能力最强 。 将质量分数为 3%的不同乳酸菌接种到牛乳培
目前，对于对乳酸菌发酵产物的生物活性研究主要 养液中，置于 37 ℃培养箱内培养，当酸度达到 80 °T
集中在食品领域，虽然化妆品市场上已经出现了乳 时取出，90 ℃灭菌 30 min，4500 r/min 离心 10 min
酸菌发酵相关的产品，但其在化妆品功效原料方面 弃沉淀得到发酵提取物，将其在–80 ℃下冻干 48 h，
研究尚不充分。有研究表明，乳酸菌能够增强皮肤 获得乳酸菌发酵提取物，分别为植物乳杆菌发酵提取
抵御光老化的能力，减缓紫外线诱导引发的皮肤光 物（FE1）、类干酪乳杆菌发酵提取物（FE2）、嗜酸
损伤，但乳酸菌防护皮肤氧化应激引起损伤的效果 乳杆菌发酵提取物（FE3）、高加索酸奶乳杆菌发酵
与作用机制均有待进一步探究 [8-9] 。 提取物（FE4）、瑞士乳杆菌发酵提取物（FE5）。
本文在已有乳酸菌抗氧化相关研究的基础上， 酸度检测：以酸碱滴定法按照文献[10]进行检
探究不同乳酸菌发酵提取物保护人皮肤细胞抵御氧 测，滴定至颜色微红，且 30 s 颜色不消失时记录
化损伤的效果与作用机制，以弥补当前乳酸菌发酵 0.1 mol/L NaOH 标准溶液体积。酸度（°T)=消耗
提取物在化妆品领域研究的不足，筛选出能够保护 NaOH 标准溶液体积（mL）/样品质量（g）。
皮肤细胞抵御氧化应激引起损伤的乳酸菌，为乳酸 1.2.2 发酵提取物的抗氧化能力检测
菌发酵成分在延缓皮肤衰老方面的使用提供依据， 对•OH 清除实验按照文献[11]进行。•OH 的清
以及为开发与制备乳酸菌发酵成分相关的化妆品原 除率按照式（1）计算：
料提供理论支撑。 清除率/% = (A 0 – A 1 + A 2 )/A 0 ×100 （1）
式中：A 0 、A 1 、A 2 分别为空白对照组（去离子水）、
1 实验部分
样品组和本底组（样品与反应液同等体积的去离子
1.1 试剂与仪器 水）的吸光度。
–
–
植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、类干酪 对•O 2 的清除实验按照文献[12]进行，•O 2 的清除
乳杆菌（ Lactobacillus paracasei ）、嗜酸乳杆菌 率计算公式同式（1）。
（Lactobacillus acidophilus）、高加索酸奶乳杆菌 1.2.3 发酵提取物对 HSF 存活率的影响
（Lactobacillus kefiri）、瑞士乳杆菌（Lactobacillus 将 V C 与 5 种不同的发酵提取物样品分别以无血
helveticus），北京市植物资源研究开发重点实验室保 清的 DMEM 培养液配制成质量浓度为 10、2、0.4、
藏；FeSO 4 、双氧水（质量分数为 30%），分析纯， 0.08、0.016 g/L 的样品。按照文献[13]培养人皮肤成
国药集团化学试剂有限公司；总抗氧化能力检测试 纤维细胞，并按照式（2）计算 HSF 存活率：
剂盒、ROS 检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶 HSF 存活率/%=[样品 OD–空白对照 OD]/(细胞
（GSH-Px）检测试剂盒、丙二醛（MDA）检测试 对照 OD–空白对照 OD)×100 （2）
剂盒、总超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 式中：OD 为光密度值。
（WST-8 法）、胞内过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒、 1.2.4 HSF 衰老模型建立
5
5
青霉素（1×10 U/L）、链霉素（质量浓度为 100 mg/L）， 计数 HSF，以 5.0×10 个/孔密度加入 96 孔板中。