Page 97 - 《精细化工》2022年第5期

第 5 期 毛 敏，等: 硒化二氢杨梅素的制备及对肿瘤细胞增殖/转移的抑制性 ·951·

[5]
且 GREENWELL 等 指出大多数植物天然产物仅对 称取 2 g DMY 于烧瓶中，精确称取 0.54 g 的 Na 2 SeO 3
癌细胞有细胞毒性。因此，开发高效低毒的天然产 溶于 10 mL 蒸馏水再转移至烧瓶中，再加入体积分
物衍生物是医药领域中的研究热点。 数 55%乙醇 60 mL 至烧瓶，用 1 mol/L HCl 溶液调
湖北恩施的藤茶和硒资源丰富，而二氢杨梅素 节反应体系 pH 为 3~4，连接旋转蒸发仪在反应温度
（DMY）是藤茶中最主要的一种天然黄酮类物质， 55 ℃下反应 20 min，降至室温后取反应液离心，用
具有一定的抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降血糖等活性功 无水乙醇淋洗，合并上清液真空干燥 48 h，即得深
能 [6-7] 。前期有研究报道，DMY 对人正常卵巢细胞 黄棕色硒化 DMY [15-16] 。
[8]
无明显细胞毒性 ，但能抑制癌细胞的增殖和迁移、 1.3 结构表征与性能测试
促凋亡、阻滞细胞周期及诱导自噬等 [9-10] 。另外，人 以蒸馏水配制质量浓度约为 0.14 g/L 的样品溶
体必须的微量元素硒能降低癌症发病率和治疗多种 液，用紫外-可见分光光度计在 200~500 nm 区间扫
癌症 [11] ；硒化物可抑制癌细胞的活性 [12] 。TSUBURA 描紫外光谱；取少量干燥样品，采用溴化钾压片法，
–1
等 [13] 也报道了一种硒化物能有效抑制乳腺癌细胞的 于红外光谱仪在 4000~450 cm 区间采集红外光谱；
增殖；NOGUEIRA 等 [14] 研究发现，硒化修饰的天然 取适量干燥样品溶于 DMSO-d 6 ，用核磁共振波谱仪
产物生理活性功能明显增强。 检测 CNMR 谱和 HNMR 谱；取适量干燥样品于 X
13
1
本文在已有研究的基础上，以 DMY 为底物、 射线衍射仪样品盘中，扫描速度 8 (°)/min 条件下采
Na 2 SeO 3 为硒化剂制备硒化 DMY，利用 UV-Vis、 集 2°~80°(2θ)的数据；取适量干燥样品在 Ar 气氛中，
FTIR、NMR、XRD、TG、原子荧光光谱对其结构 升温及降温速率均为 10 ℃/min，于综合热分析仪
和性能进行表征，选取发病率及死亡率较高的人口 检测。
腔鳞癌细胞 HSC-3 进行体外细胞活力实验和划痕实 1.4 硒含量测定
验。以期通过硒化在 DMY 结构中引入生物活性较 精密称取 0.1 g 硒化 DMY 置于带盖的微波消解
好的硒活性结构基团，使 DMY 与硒发挥协同作用， 管中，加入 5 mL 硝酸，置于微波消解仪消解。设置
增强抗肿瘤活性，有望为今后天然藤茶产物及硒资 条件：温度 160 ℃、功率 1100 W、升温时间 30 min、
源的开发利用开辟新的途径。 保温时间 30 min、降温时间 30 min。消解后置于
160 ℃的赶酸仪中，赶酸至 1 mL 后加入 4 mL 现配
1 实验部分
的体积分数 50%盐酸，继续赶酸至 1 mL 取出，用
1.1 试剂与仪器 现配体积分数 5%盐酸定容至 50 mL，用双道原子荧
DMY，质量分数 98%，陕西博耐泽生物科技有 光光度计测定硒化 DMY 中硒的质量浓度，按公式
限公司；Na 2 SeO 3 、盐酸、无水乙醇，分析纯，国药 （1）计算硒含量（%）。
集团化学试剂有限公司；硒标准溶液，100 μg/mL， 硒含量 /% (硒化 DMY中硒的质量浓度 定容体积 )  100
中国计量科学研究院；HSC-3 细胞，国家实验细胞 硒化 DMY的质量
（1）
资源共享服务平台；质量分数 0.25%的胰蛋白酶、
1.5 体外细胞活力实验
磷酸缓冲盐溶液（PBS）（pH=7.4）、DMEM 培养基，
采用 CCK-8 法 [17] ，取对数生长期的 HSC-3 细胞，
Gibco 公司；血清，Ausgenex 公司；CCK-8 试剂盒，
Biosharp 公司。 接种至 96 孔板中，每孔 100 µL 细胞悬液（8000 个
[18]
MARS 6 240/250 型微波消解仪，美国 CEM 公 细胞） 。称取 128 mg 样品溶于 DMSO，用 0.22 µm
司；AFS-9760 型双道原子荧光光度计，北京海光仪 一次性灭菌过滤膜过滤，再用含体积分数为 10%血
器公司；TU-1901 型紫外-可见分光光度计，北京普 清的 DMEM 培养基稀释成 160、80、40、20、10、
析通用仪器有限责任公司；Nicolet Avatar 370 型红 5 µg/mL，控制样品试液中 DMSO 体积分数小于
外光谱分析仪、3308 型 CO 2 培养箱、1510 型酶标仪， 0.1%。加不同质量浓度试样培养 24 h 后，每孔加入
美国 Thermo Fisher Scientific 公司；AVANCE Ⅲ HD 10 µL 含体积分数 10% CCK-8 的细胞培养液，孵育
600 MHz 型核磁共振波谱仪，德国 Bruker 公司； 30 min 后利用酶标仪测定 450 nm 处的吸光度，按公
XRD-7000 型 X 射线衍射仪，日本岛津公司；TG/DTA 式（2）计算细胞抑制率。
6300 型热重-差热综合分析仪，日本 SII 纳米有限公 抑制率/%=(A c –A s )/(A c –A b )×100 （2）
司；Axio Vert A1 型倒置相差显微镜，德国 Carl Zeiss 式中：实验组（A s ）：含细胞、细胞培养液、待测试
公司。 样、CCK-8；对照组（A c ）含细胞、细胞培养液、
1.2 硒化 DMY 的制备 CCK-8；空白组（A b ）含细胞培养液、待测试样、
按 n（DMY）∶n（Na 2 SeO 3 ）= 1∶0.5，精确 CCK-8。