Page 114 - 《精细化工》2022年第8期
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·1614·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 39 卷

            津泰斯特仪器有限公司）；Nuaire 二氧化碳培养箱                         式中：Q 为每单位质量聚合物对 Hup A 的吸附量
            （美国 Nuaire 公司）；Airtech 超净工作台（苏州安                   （mg/g）；ρ 0 为 Hup A 初始质量浓度（mg/L）；ρ t 为
            泰空气技术有限公司）。                                        吸附 t（min）时间后 Hup A 质量浓度（mg/L）；V
            1.2   方法                                           为吸附介质体积（L）；m 为聚合物的质量（g）。
            1.2.1  MIP 的制备                                         按式（1）计算 NIP 的吸附量。
                 采用沉淀聚合法        [19] 制备 MIP 和空白聚合物                 将上述方法中的 Hup A 质量浓度分别替换为
            （NIP）。准确称取 Hup A 48.46 mg（0.2 mmol）和               12.5、25、50、100、150、200、250、300、350、
            MAA 68.87 mg（0.8 mmol）置于 250 mL 圆底烧瓶               400 mg/L，其余步骤同上，振荡 6 h，按公式（1）
            中，加入 30 mL 甲醇-乙腈溶液〔V(甲醇)∶V(乙腈)=1∶                  计算吸附量。绘制等温吸附曲线。
            4〕，超声溶解，密封，室温下静置 2 h，使模板和功                         1.2.4   药物负载实验
            能单体充分作用，通过氢键形成稳定的预聚合物；                                 称取 50 mg 干燥的 MIP 粉末置于锥形瓶中，加
            加入交联剂 EGDMA 594.6 mg（3 mmol）和引发剂                   入 5 mL 300  mg/L 的 Hup A 甲醇/水〔V(甲醇)∶
            AIBN 20 mg（0.12 mmol），超声 5 min，充分混匀溶               V(水)=4∶1〕溶液，密封锥形瓶，置于恒温振荡器
            解后，通 N 2   使体系无氧后密封，将烧瓶置于集热                        上振荡 720 min，8000 r/min 离心 6 min，上清液过
            式恒温加热磁力搅拌器中，60  ℃下反应 24 h，生成                       0.45  μm 滤膜，用 HPLC 测定上清液中游离 Hup A
            白色乳液状聚合物，用无水乙醇反复洗涤沉淀 3 次，                          的含量，按公式（1）计算 MIP 吸附量。将沉淀干
            在 8000 r/min 下离心收集白色聚合物，冻干，得到                      燥后得到 MIP 载药粉末，置于干燥器中，待用。
            含 Hup A 的 MIP 白色粉末，待用。                             1.2.5   体外释放实验
                 模板洗脱处理：将含 Hup A 的 MIP 置于甲醇/                       参照《美国药典》配制模拟肠液（不含蛋白酶）：
            乙酸〔V(甲醇)∶V(乙酸)=9∶1〕溶液中，室温条件                        取磷酸二氢钾 6.8 g，加水 250 mL 使其溶解，加
            下振荡 30 min，离心分离上清液，重复 3 次，直至                       0.2 mol/L 氢氧化钠溶液 77 mL 和 500 mL 水，用
            用紫外-可见分光光度计在 312 nm 下检测不到洗脱                        0.2 mol/L 氢氧化钠溶液调节体系 pH 至 6.8，再加水
            液中 Hup A，停止洗脱，再用去离子水洗涤 3 次，                        稀释至 1000 mL，即得模拟肠液。
            制得 MIP。                                                称取 50 mg 1.2.4 节制得的载有 Hup A 的 MIP 粉
                 空白聚合物 NIP 的制备：不加模板分子 Hup A，                   末和市售 Hup A 片置于离心管中，分别加入 5 mL 模
            其余操作步骤同上。                                          拟肠液，在 37  ℃水浴中振荡释药，在一定时间间
            1.2.2   表征                                         隔移取上清液 500  μL，再加入 500  μL 新的模拟肠
                 对 Hup A、NIP、MIP、MAA 和 EGDMA 进行                液。过 0.45  μm 滤膜，用 HPLC 测上清液中 Hup A
                                                               含量，按公式（2）计算 Hup A 的累积释放率。
            红外光谱分析，KBr 压片法。
                                                                                         0 
                 利用扫描电子显微镜（SEM）拍摄电子显微照                                                  i t V     i t  1  V
                                                                 Hup A 累积释放率/%=                      100   （2）
            片以评估样品形态。将样品粉末附着到硅片上，干                                                        m Hup A
            燥并用金溅射。                                            式中：ρ t 和 ρ t   分别为 t i 和 t i–1 时刻所取上清液的
                                                                      i    i–1
                 用同步热分析仪对 Hup A、MIP 和 NIP 的热稳                  Hup A 质量浓度（g/L）；V 0 为释放介质的体积，5 mL；
            定性进行评价,  测定温度为 20~600  ℃，升温速率为                     V′为每次所取上清液的体积（mL）；m Hup A 为聚合物
            10  ℃/min。                                         所载石杉碱甲的总质量（mg）。
            1.2.3  MIP 的吸附性能测试                                 1.2.6   细胞毒性实验
                 MIP 和 NIP 各称取 10 份，每份 20 mg，分别放                   采用 MTT 法   [20] 在 L929 细胞系上进行 MIP 细胞
            在 50 mL 具塞离心管中，加入 5 mL Hup A 质量浓度                  毒性实验。NIP 作为对照组。
            为 200 mg/L 的甲醇/水〔V(甲醇)∶V(水)=4∶1〕溶                      市售 Hup A 片、MIP 和 NIP 在灭菌锅中灭菌
            液中，超声分散，室温下分别振荡 0.167、0.5、1、                       15 min 后用 DMEM 培养基配成所需质量浓度（6.25、
            2、3、4、6、8、10、12 h。高速离心 6 min（8000 r/min），          12.5、25、50、100、200 mg/L）。取对数期生长的
            将上清液过 0.22 μm 滤膜，用 HPLC 测上清液中 Hup                  小鼠成纤维细胞，用含有体积分数为 12% FBS 和体
                                                                                                          4
            A 含量，计算吸附前后溶液中的 Hup A 质量浓度，                        积分数为 1%双抗的 DMEM 培养基稀释成 4×10 个
            从而计算 MIP 的单位吸附量。绘制吸附动力学曲线。                         /mL，加入到 96 孔板中，每孔加入 100 μL。将孔板
            NIP 也如上操作，作为空白对照组。                                 置于 CO 2 培养箱中，CO 2 体积分数为 5%，37  ℃下
                 根据式（1）计算 MIP 对 Hup A 的吸附量（Q）：                 培养 24 h。取出培养了 24 h 的 96 孔板，分别加 100
                           Q = (ρ 0 –ρ t ) V/m        （1）      μL 市售 Hup A 片、MIP 和 NIP 样品，继续培养 24 h。
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