Page 165 - 《精细化工）》2023年第10期

第 10 期 张 华，等: 超声辅助离子液体提取荷叶黄酮及其抗氧化活性 ·2243·

1.2.3.4 超声功率对黄酮提取率的影响  A  A 
DPPH清除率 / %   1 1 2   100 （2）
固定[C 6 mim]BF 4 为提取溶剂，设定固液比 1∶  A 0 
25（g∶mL）、离子液体浓度 0.8 mol/L、提取温度 式中：A 为空白组的吸光度；A 为 DPPH•和样品的
70 ℃、超声时间 10 min，考察超声功率（50、100、 0 1
吸光度； A 为样品溶液本身的吸光度。
2
150、200、250 W）对荷叶黄酮提取率的影响。选
1.3.2 荷叶黄酮对•OH 的清除能力
择合适的超声功率进行后续实验。 [25]
参照 Fenton 法 并适当改进，取 3 支试管，
1.2.3.5 超声时间对黄酮提取率的影响
加入 6 mmol/L 水杨酸的乙醇溶液、6 mmol/L FeSO 4
固定[C 6 mim]BF 4 为提取溶剂，设定固液比 1∶ 溶液、不同浓度的样品溶液各 2 mL，混合后加入
25（g∶mL）、离子液体浓度 0.8 mol/L、提取温度 70 6 mmol/L 的 H 2 O 2 溶液 2 mL，于 37 ℃恒温水浴加
℃、超声功率 150 W，考察超声时间 15、20、25、 热 30 min，在 510 nm 处测定样品吸光度 A ，以去
30、35、40 min 对荷叶黄酮提取率的影响。找到最 1
离子水代替水杨酸溶液，测定吸光度 A 。空白组以
佳的超声时间。 2
去离子水代替样品溶液测定吸光度 A 。以相同浓度
1.2.3.6 提取温度对黄酮提取率的影响 0
的 V C 为阳性对照，按式（3）计算•OH 清除率。
固定[C 6 mim]BF 4 为提取溶剂，设定固液比 1∶
25（g∶mL）、离子液体浓度 0.8 mol/L、超声功率  OH清除率 / %    1 A 1 A    2   100 （3）
150 W、超声时间 30min，考察提取温度（50、60、  A 0 
70、80、90 ℃）对荷叶黄酮提取率的影响。得到最 式中：A 为空白组的吸光度；A 为样品和水杨酸溶
0
1
佳的提取温度用于实验。 液的吸光度； A 为去离子水代替水杨酸的吸光度。
2
1.2.4 响应面实验 1.3.3 荷叶黄酮还原力测定
根据单因素实验，选取了对荷叶黄酮提取率影 参考文献[26]的方法，分别吸取 2.0 mL 不同浓
响较大的 3 个单因素离子液体浓度（A）、超声功率 度的荷叶黄酮样品溶液于试管中，依次加入质量浓
（B）、超声时间（C）为独立变量，以黄酮提取率 度 1 g/L 的铁氯化钾溶液和磷酸盐溶液（pH 6.6）各
为响应变量，通过 Box-Behnken 中心组合设计进行 2.0 mL，振荡均匀后于 50 ℃水浴条件下反应 30 min，
了响应面优化，实验水平设计见表 1。 迅速冷却后加入 2.0 mL 0.6 mol/L 的三氟乙酸溶液，
离心机 4500 r/min 条件下处理 5 min，取上清液 1.0 mL，
表 1 响应面实验设计 依次加入 1 mL 蒸馏水、0.5 mL 质量分数为 1 g/L 的
Table 1 Design of response surface experiment
FeCl 3 溶液，混合均匀，于 700 nm 波长处测定吸光
水平
因素 度，以相同浓度的 V C 作阳性对照。通过测定的吸光
–1 0 1
度比较相同浓度下荷叶黄酮和 V C 还原力的强弱，吸
A 离子液体浓度/（mol/L） 0.6 0.8 1.0
光度越大，说明还原力越强。
B 超声功率/W 100 150 200
1.3.4 荷叶黄酮对油脂的抗氧化测定
C 超声时间/min 25 30 35 [27]
采用 Schaal 烘箱法 设计两组实验，一组为新

1.3 体外抗氧化实验 炼制猪油（猪油的炼制：将市售新鲜猪肥膘去皮洗
在最佳工艺条件下提取荷叶黄酮，将提取液旋 净，切成 1 cm×1 cm 小块，每 kg 加入 50 mL 水混
蒸，浓缩，以体积分数 50%乙醇进行梯度稀释，配 合，油浴锅 120 ℃下恒温炼制 20 min，过滤除渣，
冷却至 50 ℃，冷藏保存），一组为花生油。称取 3
制质量浓度分别为 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、
份 20 g 猪油放入 3 只锥形瓶中，其中 2 份分别加入
1.4、1.6 g/L 的样品溶液，避光保存。
2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）、黄酮提取液，添
1.3.1 荷叶黄酮对 DPPH•的清除能力
加量均为油脂质量的 0.02%，第 3 份不做任何添加作
参考文献[23]方法并稍作修改，测定荷叶黄酮
为空白对照，另一组花生油做同上处理。将试样放入
对 DPPH•的清除能力。制备 0.1 mmol/L DPPH 乙醇
烘箱（60±1） ℃中保温，每隔 12 h 摇匀 1 次，每隔
溶液。取 2.0 mL 不同浓度的样品溶液溶于试管中，
2 h 测定油脂过氧化值（POV，mmol/kg），连续测定
加入 2 mL DPPH 乙醇溶液混合均匀，避光静置 30
18 d，参考 GB5009.227—2016 方法测定过氧化值。
min，测定 517 nm 处的吸光度 A 。另取 2.0 mL 样
1
品溶液，加入 2 mL 无水乙醇，测定吸光度 A 。空 2 结果与讨论
2
白组以无水乙醇代替样品溶液测定吸光度 A 。以相
0
同浓度的 V C 为阳性对照，DPPH•清除率按式（2） 2.1 单因素实验
各因素对黄酮提取率的影响见图 1。
计算。