Page 111 - 《精细化工》2023年第11期

第 11 期 胡 伟，等: 比率型过氧化氢荧光探针的合成及成像应用 ·2423·

J = 8.0、2.3 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.87 (d,
J = 8.1 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.56 (t, J =
2.0 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 7.1、1.2 Hz, 2H), 7.37~7.27
(m, 4H), 7.19 (dd, J = 8.2、1.8 Hz, 1H), 6.96 (dd, J =

7.8、1.9 Hz, 1H), 5.07 (t, J = 1.0 Hz, 2H), 3.82 (s,
13
3H) 。 CNMR (100 MHz, DMSO-d 6 ), δ: 166.06, 1.3 双光子荧光活性截面
156.73, 155.92, 148.39, 148.31, 143.56, 136.75, 采用双光子诱导荧光法测定 MQH 2 O 2 在反应前
135.83, 134.73, 130.76, 130.14, 128.55, 128.38, 后的双光子吸收截面。首先，以 10 µmol/L 罗丹明 B
128.23, 122.87, 120.22, 119.40, 114.20, 110.16,
+
107.34, 70.18, 54.73。HRMS (ESI), C 24 H 19 N 2 O 2 S , 乙醇溶液为参比溶液，按式（1）计算探针 MQH 2 O 2
+
m/Z: [M+H] 计算值 399.1167；测试值 399.1179。 及 MHQMB 的荧光量子产率：
1.2.5 2-(6-甲 氧基苯并 [d]噻唑 -2- 基 ) 喹啉 -6- 醇  s  An F （1）
rs s r
sr r
（MHQMB）的制备 A nF
在 0 ℃下，向 100 mL 单口烧瓶中加入 20 mL 式中：Φ S 为量子产率；A 为最大吸收波长处的吸光
无水二氯甲烷和 520 mg（1.40 mmol）Ⅷ，并在搅拌 度，A ≤ 0.05；n 为溶剂的折射率；F 为利用最大吸
条件下缓慢将 5.20 mL 1 mol/L BBr 3 的二氯甲烷溶 收波长激发后的荧光光谱积分面积；下标 s、r 分别
液滴加至上述反应液中，升温至室温反应 12 h，TLC 为待测样品和参比溶液；Φ r 为罗丹明 B 溶液（参比
〔展开剂 V(石油醚)∶V(乙酸乙酯) = 2∶1 混合溶 溶液）的量子产率（0.71）。
液〕实时监测至反应完全。冰水浴下缓慢加入过量 再以罗丹明 6G 的甲醇溶液（5 µmol/L）为参比
的饱和 NaHCO 3 溶液将反应液调至中性，二氯甲烷 溶液，测定 MQH 2 O 2 与 H 2 O 2 反应前后在甲醇溶液中
萃取并干燥，减压旋干二氯甲烷，采用 V(石油醚)∶ 的双光子吸收截面 δ（激发波长 710~800 nm），再通
V(乙酸乙酯) = 6∶1 混合溶剂为洗脱剂，柱层析分离 过式（2）计算双光子荧光活性截面：
2
n c 
得黄色固体 301 mg，产率 71%。熔点：158~159 ℃。   S  sr s r r （2）
1 S 2
HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ), δ: 8.38 (s, 1H), 8.06 S  n c
rs r s
(dd, J = 7.9、2.1 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 式中：δ S 为双光子荧光活性截面，GM（1 GM = 1
7.83 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 10 −50 cm sphotons molecule ）；S 为双光子荧光光
−1
4
−1
7.34~7.28 (m, 2H), 7.13 (dd, J = 8.7、1.9 Hz, 1H), 6.96 谱积分面积；Φ 为量子产率；c 为溶液浓度，µmol/L；
13
(dd, J = 7.8、1.9 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H)。 CNMR (100
n 为溶剂的折射率；下标 s、r 分别为待测样品和参
MHz，DMSO-d 6 ), δ: 166.06, 156.73, 155.76, 148.39, 比溶液；δ r 为参比溶液罗丹明 6G 在甲醇溶液中的双
148.37, 142.44, 135.83, 134.46, 131.78, 131.19,
122.87, 120.26, 119.89, 114.20, 111.88, 107.34, 光子吸收截面，为 70 GM。
+
+
54.73。HRMS (ESI), C 17 H 13 N 2 O 2 S , m/Z: [M+H] 计算 1.4 生物模型的构建
–1
值 309.0698；测试值 309.0679。FTIR (v/cm )：3607 1.4.1 细胞培养
6
（O—H 键的伸缩振动）；1250~1750（喹啉和苯并 将密度为 110 个/mL PC12 细胞接种于含有体
噻唑中 C—N 键的伸缩振动）；1225~1060（甲氧基 积分数为 1%青霉素和链霉素和 10%胎牛血清的
中 C—O—C 键的伸缩振动）。 DMEM 细胞培养基中，于 37 ℃培养箱（体积分数
目标化合物的合成路线如下所示。 为 5% CO 2 、体积分数为 95%空气）中培养。成像前
一天将细胞转移至 T25 细胞培养瓶中使其贴壁生长
至适当密度。成像前使用磷酸盐缓冲溶液（PBS，
pH=7.4）将细胞清洗 2 次，成像时使用双光子激发
波长 730 nm，荧光收集范围为 420~480 nm（蓝色通
道）及 530~600 nm（绿色通道）。
1.4.2 细胞毒性实验
采用 MTT 法测定 MQH 2 O 2 的细胞毒性。将 PC12
4
细胞接种于 96 孔板中（接种密度 4.5×10 个/mL），
将不同浓度 MQH 2 O 2 （0、2、5、10、20、30 µmol/L）
分别加到 100 μL 含体积分数 10% DMSO 的 DMEM
细胞培养基中（每个浓度设 3 组平行实验）。将不同
浓度 MQH 2 O 2 标记的 PC12 细胞孵育 24 h 后，在每