Page 115 - 《精细化工》2023年第11期

第 11 期 胡 伟，等: 比率型过氧化氢荧光探针的合成及成像应用 ·2427·

图 8 MQH 2 O 2 与细胞内源性 H 2 O 2 的双光子激光共聚焦 图 9 各组细胞的双光子激光共聚焦成像（a）；图 9a 各
成像（a）；图 8a 各组细胞中绿色通道与蓝色通道
组细胞中绿色通道与蓝色通道的 I 535 /I 465 （b）
的 I 535 /I 465 （b） Fig. 9 Two-photon laser confocal imaging of cells in each
Fig. 8 Two-photon laser confocal imaging of MQH 2 O 2 and group (a); I 535 /I 465 of green channel and blue
endogenous H 2 O 2 in cells (a); I 535 /I 465 of green channel in each group of cells in Fig. 9a (b)
channel and blue channel in each group of cells in
Fig. 8a (b) 2.6 MCAO 模型的组织成像
利用 Z-Stack 技术，观察探针 MQH 2 O 2 在脑组
当细胞使用质量浓度为 2 mg/L 的 PMA 预处理
织中不同深度的成像，结果如图 10 所示。
细胞 1 h 后，用质量浓度为 2 mg/L 的 NAC（H 2 O 2
清除剂）处理细胞，绿色通道荧光再次消失，绿色
通道与蓝色通道的荧光强度比值明显降低，且低于
对照组（PC12 细胞未孵育 PMA 和 NAC，直接与
MQH 2 O 2 孵育），说明 NAC 可清除掉包括 PMA 刺激

下产生的所有内源性 H 2 O 2 ，充分证实探针 MQH 2 O 2

可检测细胞中内源性 H 2 O 2 的水平变化。 图 10 探针 MQH 2 O 2 的组织成像穿透深度
2.5 OGD/R 模型中的细胞成像 Fig. 10 Tissue imaging penetration depth of probe MQH 2 O 2

使用 OGD/R 来模拟脑卒中过程，考察脑卒中过
由图 10 可知，该探针的成像深度可达 225 μm，
程中 H 2 O 2 含量的变化。结果如图 9 所示。
充分证明该探针可实现利用双光子激光显微镜对深
由图 9 可知，相比于 Sham 组，对照组 I 535 /I 465
部组织中的 H 2 O 2 进行成像分析。
增加明显；阴性对照组的 I 535 /I 465 相比于 NOX2KD
随后按照 1.4.5 节实验方案，通过 MCAO 成功
组有明显升高，结果清晰显示基因沉默后 H 2 O 2 的含
建立小鼠脑卒中模型，分为正常小鼠脑组织、卒中
量急剧降低。进一步证实探针 MQH 2 O 2 可以检测
1 及 3 d 3 种小鼠模型。将小鼠模型分为两组，对照
OGD/R 过程中 H 2 O 2 的含量变化。 组和 APO（Apocynin，NADPH 氧化酶抑制剂）组，

对照组为小鼠模型建好后直接尾静脉注射探针
MQH 2 O 2 ；APO 组在小鼠模型建好后，先注射 APO

（10 mg/L，200 μL），30 min 后再注射探针 MQH 2 O 2
（10 µmol/L），并分别对其进行双光子激光共聚焦
成像。脑组织切片成像如图 11 所示。