Page 114 - 《精细化工》2023年第11期

·2426· 精细化工 FINE CHEMICALS
由图 5a 可见，除 H 2 O 2 外，干扰物均未使
MQH 2 O 2 的 I 535 /I 465 发生明显变化，表明该探针对
H 2 O 2 可进行特异性识别。此外，探究了 MQH 2 O 2 与
H 2 O 2 （300 µmol/L）在不同 pH 下反应 30 min 前后
I 535 /I 465 的变化，结果见图 5b。由图 5b 可以看出，
随着 pH 的不断增加，MQH 2 O 2 +H 2 O 2 体系的 I 535 /I 465
显 著增加 ，这 是由于 在中 性或弱 碱性 条件 下
MQH 2 O 2 更多以离子状态存在，而通过上述分析可
知，离子形式的 MHQMB 具有更高的 ICT 能力，从而
在长波长处展现出更高的荧光强度。更为重要的是，
本文研究对象均为中性环境，因此，保证了 MQH 2O 2
在检测 H 2O 2 时具有合适的灵敏度。
2.3 细胞毒性
在生物成像之前，考察了探针 MQH 2 O 2 的细胞
毒性，结果如图 6 所示。
图 6 细胞在不同浓度 MQH 2 O 2 孵育后的细胞存活率
Fig. 6 Cell survival rate of cells incubated with different
concentrations of MQH 2 O 2
由图 6 可见，探针 MQH 2 O 2 浓度达 30 µmol/L
时，仍有>83%的细胞可以存活，表明该探针毒性较
小，可用于较长时间观察细胞内 H 2 O 2 的水平变化。
2.4 细胞外/内源性 H 2 O 2 的检测
2.4.1 细胞外源性 H 2 O 2 的检测
按 1.4.3 节实验方案，探究探针 MQH 2 O 2 对细胞
外源性 H 2 O 2 的成像分析，结果如图 7 所示。
第 40 卷
图 7 MQH 2 O 2 与不同浓度 H 2 O 2 （0、10、50、100 µmol/L）
在细胞中的双光子激光共聚焦成像（a）；图 7a 各
组细胞中绿色通道与蓝色通道的 I 535 /I 465 （b）
Fig. 7 Two-photon laser confocal imaging of MQH 2 O 2 and
different concentrations of H 2 O 2 (0, 10, 50, 100
µmol/L) in cells (a); I 535 /I 465 of green channel and
blue channel in each group of cells in Fig. 7a (b)
由图 7 可知，随着 H 2 O 2 浓度的增加，绿色通道
荧光逐渐增强，而蓝色通道荧光逐渐减弱，绿色通
道与蓝色通道的 I 535 /I 465 呈梯度增加，表明该探针可
实现高灵敏检测细胞外源性 H 2 O 2 。
2.4.2 细胞内源性 H 2 O 2 的检测
为了探讨探针 MQH 2 O 2 检测细胞内源 H 2 O 2 的
能力，利用 PMA 刺激细胞产生 H 2 O 2 ，并用 NAC 清
除细胞内 H 2 O 2 ，评估探针对于内源性 H 2 O 2 的检测
能力，结果如图 8 所示。由图 8 可知，未处理的细
胞（对照组）使用探针 MQH 2 O 2 孵育后蓝色通道荧
光较强，绿色通道几乎没有荧光；而使用质量浓度
为 2 mg/L PMA 预处理后，观察到细胞内绿色通道
荧光显著增强，蓝色通道荧光却几乎消失，说明
PC12 细胞在 PMA 刺激下产生大量 H 2 O 2 。因此，绿
色通道与蓝色通道的 I 535 /I 465 有明显增加。