Page 163 - 《精细化工》2023年第11期

第 11 期 宋添力，等: 竹节参多糖通过 PI3K/AKT/NF-κB 信号通路对急性肝损伤大鼠的影响 ·2475·

1.2.8 蛋白免疫印迹检测 调节炎症 [21] ，如铁皮石斛多糖 [22] 可以抑制 NLRP3
蛋白免疫印迹（Western blot）检测 PI3K、 炎症小体的表达，降低促炎细胞因子（IFN-γ、IL-1β、
p-PI3K、AKT、p-AKT、NF-κB、p-NF-κB、IL-1β IL-6）的表达；黄芪多糖 [23] 可以降低促炎细胞因子
蛋白的表达水平。 （IL-1β、IL-6、IFN-γ）和肿瘤坏死因子(TNF)-α 的
将大鼠肝组织通过匀浆、变性和超声提取样本 表达。
总蛋白，用 BCA 蛋白质试剂盒测量蛋白质浓度以确
定上样量。配制聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
凝胶，并对蛋白质进行上样、电泳、转膜、封闭，
然后将膜与用一抗稀释液稀释好的一抗（检测蛋白
的抗体）在 4 ℃孵育 12 h，一抗包括 PI3K（体积比
1∶1000）、p-PI3K（体积比 1∶1000）、AKT（体积
比 1∶1000）、p-AKT（体积比 1∶500）、NF-κB（体
积比 1∶2000）、p-NF-κB（体积比 1∶2000）、IL-1β
（体积比 1∶1000）和 GAPDH（体积比 1∶2000） ；
将膜与用二抗稀释液稀释好二抗（体积比 1∶10000）

在室温下孵育 1 h，再次用 TBST 缓冲液洗涤 3 次， 图 1 6 组大鼠体质量随时间的变化趋势
吸干多余水分；用化学发光试剂检测抗原-抗体复合 Fig. 1 Trend of body mass change of rats with time in six groups
物，Fluor Chem E 凝胶成像系统捕获图像，并使用
PSPJ 是通过抑制丙二醛的产生、降低一氧化氮
Image J 软件进行凝胶图像分析。
水平、增加超氧化物歧化酶的数量达到抑制炎症的
1.2.9 统计学分析
采用 SPSS 25.0 统计软件进行统计数据并分析 作用 [24] 。

结果，计量数据以均数±标准差（±s）表示，样品数 表 1 6 组大鼠的肝脏指数比较
n=5；多组间比较采用单因素方差分析（One-way Table 1 Comparison of liver index of rats in six groups
ANOVA），两两比较采用 LSD 检验，若不符合正态 组别 m 0/g m 1/g I/%
分布采用非参数检验，以 P<0.05 为差异有统计学意 空白对照组 220.00±1.00 5.63±0.59 0.025±0.002
义。利用 Origin 2022 软件进行制图。 模型组 291.33±4.72 ① 8.98±0.24 0.031±0.001 ①
①
LBSZ 组 232.33±15.50 6.12±0.77 0.026±0.001
2 结果与讨论
PSPJ 低剂量组 274.67±9.06 7.84±0.18 0.028±0
2.1 PSPJ 对 ALI 大鼠一般情况和体征的影响 PSPJ 中剂量组 244.67±10.26 6.32±0.65 0.026±0.002
实验期间，空白对照组大鼠毛色光滑，动作灵 PSPJ 高剂量组 222.00±7.00 ② 5.60±0.53 0.025±0.001 ②
②
敏，反应迅速，食欲佳，大便正常，无异常反应出 ①与空白对照组相比，P<0.05；②与模型组相比，P<0.05。
现；而模型组大鼠在造模后出现精神萎靡，活动减
由表 1 可知，与空白对照组相比，模型组体质
少，毛色杂乱泛黄无光泽，经常出现弓背现象；空
量、肝脏质量和肝脏指数均显著上升（P<0.05），证
白对照组大鼠反应迅速，动作灵敏，皮毛整洁有光
明模型的有效性。这是由于 CCl 4 作为一种肝毒性化
泽；模型组大鼠活动较少，皮毛油腻；LBSZ 组和
学试剂，影响 DNA 和细胞膜，导致脂质氧化降解，
PSPJ 各剂量给药组相对模型组一般情况均有不同
程度缓解和好转，其中，LBSZ 组和 PSPJ 高剂量组 激发肝组织的氧化应激，刺激肝细胞分泌大量炎症
干预后观察到上述体征改善最为明显。 因子，进而刺激免疫相关细胞产生大量介质诱导局
2.2 PSPJ 对 ALI 大鼠体质量及肝脏指数的影响 部炎症反应，激活半胱氨酸吸入蛋白酶，并导致细
图 1 为 6 组大鼠体质量随时间的变化趋势。由 胞凋亡，所以出现大量腹水及炎症 [25-26] ；与模型组
图 1 可知，空白对照组大鼠在正常喂养条件下，体 比较，PSPJ 低剂量组、PSPJ 中剂量组、PSPJ 高剂
质量相对稳定；模型组大鼠由于体内炎症及腹水的 量组体质量、肝脏质量和肝脏指数均降低，表明
不断增多，体质量大体上持续上升。PSPJ 中、高剂 PSPJ 通过降低氧化应激，增强抗氧化能力，从而达
量组及 LBSZ 组大鼠体质量先有所增加，后又恢复 到抑制肝脏炎症反应，对急性肝炎有一定的治疗效
正常，可能是由于用药之后身体炎症及腹水减轻所 果。尤其是 PSPJ 高剂量组和 LBSZ 组体质量、肝脏
致。由于天然多糖具有较高的生物安全性、生物降 质量和肝脏指数水平显著降低，具有统计学意义。
解性及多种生物活性，可以通过相关的信号通路来 此外，PSPJ 高剂量组效果接近于 LBSZ 组。LBSZ