Page 164 - 《精细化工》2023年第12期

·2706· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 40 卷

with MIC of 1.50 g/L, significantly improved the C. albicans cell membrane permeability, led to the efflux
of cell contents, and inhibited the biofilm formation with the inhibition rate of flavonoid of Aurantiacus
group reaching up to 46.59%.
Key words: Osmanthus fragrans; flavonoids; response surface optimization; antibacterial activity; Candida
albicans; separation technology

龋齿是全世界最常见的细菌性慢性人类口腔疾 桂花黄酮对 C. albicans 的最小抑菌浓度（MIC）及
病，六岁及以下的儿童早期龋齿在多国蔓延，已成 其对细胞膜通透性以及生物膜形成的影响，以期为
为一个严重的儿童口腔健康问题。白色念珠菌 探究桂花黄酮对 C. albicans 抑菌活性及构效关系和
（Candida albicans，简写为 C. albicans）是龋齿形 不同品种桂花的栽培及应用提供参考。
成中重要的致病菌之一，它能黏附于牙釉质表面，
[1]
并利用菌丝入侵牙本质和牙髓腔内 。C. albicans 作 1 实验部分
为一种在人体多个器官存在的致病菌，在人体免疫力 1.1 材料、试剂与仪器
下降时会大量繁殖造成感染，危害人体健康 [2-5] 。C. 金桂、银桂、丹桂、四季桂，产地为湖北省咸
albicans 不仅能利用蔗糖、葡萄糖和麦芽糖等碳水化 宁市，经南京林业大学国际木犀（桂花）属植物栽
合物产生有机酸和二氧化碳，并在口腔中形成碳酸， 培品种登录中心的专家进行各桂花品种鉴定，经
还能分泌天冬氨酸蛋白酶并在酸性条件下溶解正常 –80 ℃真空冷冻干燥 48 h 后，磨粉过 60 目筛，密封，
[6]
的牙本质胶原前体 。因此，寻找 C. albicans 的天然 置于 4 ℃冰箱中备用；C. albicans（BNCC336485），
抑菌剂对于为龋齿的临床防治具有重要意义。 河南省北纳生物检验检测有限公司；沙式液体培养
桂花（ Osmanthus fragrans Lour., 简写 为 O. 基（ HB0253-71 ， SDB ）、 沙 式琼脂 培养基
fragrans），木犀科木犀属，是中国十大传统名花之 （HB0253-81，SDA），青岛海博生物技术有限公司；
一。中国桂花有 150 多个品种，可分为丹桂、银桂、 Roswell Park Memorial Institute-1640 培养基
金桂和四季桂 4 个品种群。桂花富含黄酮类、酚类、 （RPMI-1640），赛默飞世尔科技（中国）有限公司；
萜类、木脂素类、苯丙素类等 100 多种有效成分， 芦丁（质量分数≥98%）、齐墩果酸（质量分数≥
具有抗氧化、抗炎、抑菌、抗肿瘤、保护神经、抗 98%）、纤维素酶（50 U/mg），上海源叶生物科技有
[7]
衰老等药理活性 。近年来，大量文献研究表明， 限公司；无水乙醇，AR，无锡市亚盛化工有限公司；
桂花中含有多种抗菌成分，其中纯化后的桂花黄酮 NaNO 2 、Al(NO 3 ) 3 、NaOH、二甲基亚砜（DMSO）、
对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和变 磷酸二氢钾，AR，国药集团化学试剂有限公司；苯
形链球菌具有抑菌效果，表明桂花黄酮有作为天然 酚，AR，广东光华科技股份有限公司；浓硫酸（质
抑菌剂的潜能 [8-10] 。但是桂花黄酮对龋齿致病菌之 量分数 98%）、丙酮，AR，南京化学试剂有限公司；
一的 C. albicans 抑菌效果的研究还处于初级阶段。 总蛋白定量测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。
目前，常用的植物黄酮提取方法主要有超声辅 TG16A-WS 型高速离心机，济南鑫贝生物技术
助提取法、热水浸提法、有机溶剂萃取法、酶辅助 有限公司；RE-52A 型真空旋转蒸发仪，上海亚荣生
提取法和双水相萃取法。其中，热水浸提法、有机 化仪器厂；SpectraMax i3x 型酶标仪，美国美谷分子
溶剂萃取法、酶辅助提取法和双水相萃取法普遍存 仪器有限公司；Agilent 1100 型高效液相色谱仪，安
在提取率低、溶剂消耗大和溶剂污染的问题 [11] ，而 捷伦科技（中国）有限公司；AB SCIEX QTRAP 4500
超声辅助提取法具有提取率高、适用范围广、安全 型液质联用仪，美国应用生物系统公司；UV-1200
性好等优点，是提取黄酮的主要方法。为了更好地 型紫外-可见分光光度计，上海美谱达仪器有限公
保留超声辅助提取法的优点，同时填补桂花黄酮对 司；雷磁 DDS-307A 型电导率仪，上海仪电科学仪
C. albicans 的抑菌效果与其品种之间关系的空白， 器股份有限公司。
本文选用金桂、银桂、丹桂和四季桂为原料，探究 1.2 方法
超声提取法、超声辅助酶提取法和超声辅助双水相 1.2.1 桂花黄酮的提取
提取法对桂花黄酮提取率的影响，并选择提取率最 通过前期实验得知，采用超声提取、超声辅助
高的方法进行工艺优化，采用高效液相色谱-串联质 酶提取和超声辅助双水相提取 3 种方法提取桂花黄
谱（UPLC-MS/MS）确定其单体组分，确定 4 个品 酮的过程中，4 种桂花黄酮的提取率均为金桂>丹桂
种桂花中黄酮的含量及单体成分的差异；测定 4 种 >四季桂>银桂，因此，选取金桂进行提取方法的筛