Page 165 - 《精细化工》2023年第12期

第 12 期 邵越楣，等: 不同超声辅助提取桂花黄酮及其抑菌性 ·2707·

选及后续提取工艺的优化。 （40%、50%、60%、70%、80%）下提取 60 min，
超声提取法：取 2.0 g 桂花粉末，置于 100 mL 锥 研究乙醇体积分数对桂花黄酮提取率的影响。
形瓶内，按照液固比 20 mL/g 加入体积分数为 60%的乙 称取 2.0 g 桂花粉末，固定乙醇体积分数 60%、
醇水溶液，置于超声波清洗机中，超声（200 W）提取 温度 30 ℃、超声功率 200 W，在不同液固比（10、
60 min，5000 r/min 离心 10 min，过滤，收集提取液。 20、30、40、50 mL/g）下提取 60 min，研究液固比
超声辅助双水相提取法：称取 35.0 g 磷酸氢二 对桂花黄酮提取率的影响。
钾溶解于 45 mL 水中，再加入无水乙醇使体系总质 称取 2.0 g 桂花粉末，固定液固比 20 mL/g、乙
量为 100.0 g，构成乙醇-磷酸氢二钾双水相体系；取 醇体积分数 60%、温度 30 ℃，在不同超声功率（120、
2.0 g 桂花粉末加入上述双水相体系中振荡后混合 140、160、180、200 W）下提取 60 min，研究超声
均匀，置于超声波清洗机中，超声（200 W）提取 功率对桂花黄酮提取率的影响。
60 min，5000 r/min 离心 10 min，过滤，分别收集 称取 2.0 g 桂花粉末，固定液固比 20 mL/g、乙
上下相提取液。 醇体积分数 60%、温度 30 ℃、超声功率 200 W 下
超声辅助酶提取法：将 2.0 g 桂花粉末加入 提取不同时间（20、30、40、50、60 min），研究超
16 mL 水中，再加入 0.32 g 纤维素酶，搅拌下于 55 ℃ 声时间对桂花黄酮提取率的影响。
酶解 30 min，升温至 90 ℃灭活 2 min，加入 24 mL 称取 2.0 g 桂花粉末，固定液固比 20 mL/g、乙
无水乙醇，使乙醇最终体积分数为 60%，置于超声 醇体积分数 60%、超声功率 200 W，在不同温度（30、
波清洗机中，超声（200 W）浸提 60 min，5000 r/min 40、50、60、70 ℃）下提取 60 min，研究温度对桂
离心 10 min，过滤，收集乙醇提取液。 花黄酮提取率的影响。
1.2.2 桂花黄酮含量测定 以金桂为目标品种，根据单因素实验结果，选
采用 NaNO 2 -Al(NO 3 ) 3 比色法 [12] 测定桂花黄酮 取温度、液固比、乙醇体积分数为考察因素，以提取
含量。具体步骤为：准确称取 10.0 mg 芦丁标准品， 率为响应值，采用响应面法进行 Box-Behnken Design
加入体积分数 70%的乙醇水溶液配成质量浓度为 （BBD）响应面实验，优化桂花黄酮提取的工艺条件，
0.1 g/L 芦丁标准溶液；分别量取 0、1.0、2.0、3.0、 其因素与水平的选择见表 1。
4.0、5.0 mL 芦丁标准溶液置于 10 mL 容量瓶中，并
表 1 响应面实验因素与水平
用体积分数为 70%的乙醇水溶液补充至 5.0 mL；再 Table 1 Factors and levels of response surface test
加入 0.5 mL 质量分数为 5%的 NaNO 2 溶液，混匀 因素水平
静置 6 min；再加入 0.5 mL 质量分数为 10%的 因素
–1 0 1
Al(NO 3 ) 3 溶液，混匀静置 6 min；最后加入 3 mL 质 A 温度/℃ 40 50 60
量分数为 4%的 NaOH 溶液，混匀静置 15 min；用 B 液固比/(mL/g) 10 20 30
体积分数为 70%的乙醇水溶液定容至刻度，混匀静 C 乙醇体积分数/% 40 50 60
置 10 min 后，测定溶液在 510 nm 处的吸光度。根
1.3 桂花黄酮成分分析与抑菌性能测试
据芦丁溶液的质量浓度（X）和吸光度（Y）得到标
1.3.1 成分分析
准曲线方程为：Y=6.7493X+0.046（R² = 0.9985）。取
液相色谱条件：Agilent SB-C18 色谱柱（100 mm×
桂花黄酮提取液 5.0 mL，并以其代替芦丁标准溶液，
2.1 mm，1.8 µm）；柱温 40 ℃；流量 0.35 mL/min；
按照以上步骤测定其在 510 nm 处的吸光度，根据标
进样量 4 μL；流动相 A 为体积分数为 0.1%的甲酸
准曲线方程得到提取液中黄酮的质量浓度，按下式
水溶液，B 为体积分数为 0.1%的甲酸乙腈溶液，按
计算桂花中总黄酮的提取率：
  照表 2 的洗脱梯度进行洗脱。
VV
/ %  提取率 2  100 （1）

MV 1 表 2 HPLC 洗脱梯度
式中：ρ 为粗提取液中总黄酮的质量浓度，g/L；V Table 2 HPLC elution gradients
序号 时间/min 流动相 A 体积分数/% 流动相 B 体积分数/%
为粗提取液总体积，mL；V 1 为取样体积，mL；V 2
为稀释体积，mL；M 为桂花粉末质量，mg。 1 0 95 5
2 9 5 95
1.2.3 桂花黄酮提取工艺的优化
3 10 5 95
通过单因素实验和响应面实验优化桂花黄酮提
4 11 95 5
取工艺。 5 14 95 5
称取 2.0 g 桂花粉末，固定液固比 20 mL/g、温
度 30 ℃、超声功率 200 W，在不同乙醇体积分数 质谱条件：电喷雾离子源（ESI），温度 550 ℃；