Page 192 - 《精细化工》2023年第6期

·1342· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 40 卷

1.3.3 温度对裸藻蛋白泡沫分离的影响 白溶液：称取 0.12 g 裸藻蛋白溶于 30 mL 蒸馏水中），
4
在 pH 为 5.5、装液量为 300 mL、稀释倍数 15 加入 10 mL 大豆油，然后以 1×10 r/min 均质 2 min。
倍的条件下，探究温度的影响。通过回收率和富集 在底部吸取乳液 20 μL，立即加入 5 mL 质量分数为
比确定最佳温度。 0.1%的 SDS 水溶液。以质量分数为 0.1%的 SDS 水
1.3.4 稀释倍数对裸藻蛋白泡沫分离的影响 溶液为空白对照，在 500 nm 波长处测量裸藻蛋白-
在 pH 为 5.5、装液量为 300 mL、温度为 30 ℃ 大豆油乳液的吸光度。乳化能力按式（5）测定：
的条件下，探究稀释倍数的影响。通过回收率和富 a / %  A  100 （5）
500
集比确定最佳稀释倍数。 式中：α 为乳化能力，%；A 500 为裸藻蛋白-大豆油
1.4 裸藻蛋白泡沫分离工艺优化实验 乳液在 500 nm 波长处的吸光度，下同。
根据单因素实验结果，用 Box-Behnken 设计方 将均质的乳液静置 30 min，用相同的方法测定
案 [18] ，以 A（pH）、B（装液量）、C（温度）、D（稀 静置 30 min 后裸藻蛋白-大豆油乳液的吸光度。乳
释倍数）为因素，以回收率和富集比为指标。响应 化稳定性按式（6）测定：
面因素水平设计及其可行性见表 1。 a s / %  (A 30 / A 500 ) 100 （6）
式中：α s 为乳化稳定性，%；A 30 为裸藻蛋白-大豆油
表 1 响应面因素水平设计
Table 1 Response surface factor level design 乳液静置 30 min 后在 500 nm 波长处的吸光度。
1.5.4 裸藻蛋白起泡性和泡沫稳定性的测定
水平
因素 分别配制质量分数为 0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、
–1 0 1
4
1.0%的裸藻蛋白溶液 20 mL，然后以 1×10 r/min 的
A 5.0 5.5 6.0
B/mL 250 300 350 速率均质 2 min。记录均质结束时的泡沫体积，起泡
C/℃ 25 30 35 性按式（7）测定：
D/倍 10 15 20 p / %  (V 1 / ) 100V  （7）

式中：p 为起泡性，%；V 1 、V 分别为均质结束时的
1.5 裸藻蛋白功能性的测定 泡沫和均质前的溶液体积，mL。
1.5.1 裸藻蛋白持水量的测定 在室温下静置 30 min 后记录泡沫体积，泡沫稳
裸藻蛋白液经泡沫分离后收集，然后经过冷冻 定性按式（8）测定：
干燥（冷冻温度为–35 ℃、冷冻时间为 12 h）制成 p /% =(V /V ) 100 （8）
s 2 1
粉末。在离心管中称取 6 份 0.1 g 裸藻蛋白，加入
式中：p s 为泡沫稳定性，%；V 1 、V 2 分别为均质结
10 mL 蒸馏水，分别在 20、30、40、50、60、70 ℃ 束时、静置 30 min 后的泡沫体积，mL。
3
下水浴加热 1 h，然后以 3×10 r/min 离心 15 min，倒
1.6 UV-Vis 光谱测定
掉上层清液并称量残渣质量。持水量按式（3）测定： 用 0.5 mol/L 冰醋酸溶解裸藻蛋白，配制成质量
m  m
h  2 1 （3） 浓度为 2 g/L 的溶液，用紫外-可见分光光度计进行
m 测试，扫描波长范围 200~400 nm，同时以 0.5 mol/L
式中：h 为持水量，g/g；m、m 1、m 2 分别为样品质量、
冰醋酸为空白。
离心管和样品的总质量、离心管和残渣的总质量，g。
1.7 FTIR 测定
1.5.2 裸藻蛋白持油量的测定
采用 KBr 压片法通过傅里叶变换红外光谱仪对
在离心管中准确称量 6 份 0.1 g 裸藻蛋白，加入
裸藻蛋白进行测试，再通过 Peakfit Version 软件分
10 mL 大豆油，然后分别在 20、30、40、50、60、
3
70 ℃下水浴加热 1 h，以 3×10 r/min 离心 15 min， 析裸藻蛋白的二级结构，最后用积分面积计算各二
级结构的相对含量。
倒掉上层清液并称量残渣质量。持油量按式（4）测定：
m  m 1.8 氨基酸测定
l  2 1 （4） 采用全自动氨基酸分析仪进行测试，色谱柱为
m
+
式中：l 为持油量，g/g；m、m 1 、m 2 分别为样品质 Na 型阳离子交换柱（色谱柱尺寸 4.6 mm×60 mm，
量、离心管和样品的总质量、离心管和残渣的总质 填料为 3 μm 颗粒）；离子交换脂 2622，检测器为紫
量，g。 外-可见光检测器；显色剂为茚三酮/醋酸钠缓冲液；
1.5.3 裸藻蛋白乳化能力和乳化稳定性的测定 缓冲液系统为柠檬酸缓冲液 B1（pH 3.2）、B2（pH 3.0）、
分别配制质量分数为 0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、 B3（pH 4.0）、B4（pH 4.9）；缓冲液流速为 0.4 mL/min；
1.0%的裸藻蛋白溶液 30 mL（如配制 0.4%的裸藻蛋 柱温为 55 ℃，反应温度为 135 ℃。