Page 198 - 《精细化工》2023年第6期

·1348· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 40 卷

与更多的气体结合形成了稳定的气泡 [28] 。 如图 13 所示，蛋 白 有 许 多特 征吸 收峰，
–1
2.4 UV-Vis 吸收光谱分析 1300~1200 cm 处为酰胺Ⅱ带的 C—O 和 C—O—C
–1
按照 1.6 节实 验方 法，对 裸藻 蛋白进 行 了 键的伸缩振动；1400 cm 处为酰胺Ⅱ带 N—H 键的
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UV-Vis 吸收光谱测定，结果见图 12。 弯曲的顺式构象；1600 cm 处为酰胺Ⅰ带，是蛋白
质典型肽键 （ O==C — N — H ）的伸 缩振动峰；
–1
2850~2980 cm 处为酰胺 B 带（—NH 和—OH 的伸
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缩振动峰）；3400~3300 cm 处为酰胺 A 带的吸收峰
（N—H 伸缩振动） [31] 。运用 Peakfit Version 软件对
FTIR 谱图中酰胺Ⅰ带进行了分析，得出裸藻蛋白酰
胺Ⅰ带的拟合谱图，如图 14 所示。每个峰代表 FTIR
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谱图在 1700~1600 cm 的二阶导数拟合，然后根据
图 14 来计算蛋白的二级结构含量，结果如表 5 所示。
从表 5 可知，裸藻蛋白的二级结构以 β-折叠为主，
占 32.12%，少数为 β-反向和无规卷曲结构。α-螺旋

图 12 裸藻蛋白的 UV-Vis 吸收光谱 和 β-折叠是比较有序的蛋白二级结构，具有较高的
Fig. 12 UV-Vis adsorption spectrum of Euglena protein 稳定性，β-转角和无规卷曲是无序结构。

如图 12 所示，裸藻蛋白在 230 nm 左右达到最 表 5 裸藻蛋白二级结构的相对含量
*
大吸收，这是由于肽键—C==O 的 n—π 的跃迁所产 Table 5 Relative content of secondary structure of Euglena
生 [29] ，符合蛋白三螺旋结构的紫外吸收特征；而在 protein
二级结构 β-反向 β-转角 无规卷曲 α-螺旋 β-折叠
波长 280 nm 左右也出现了吸收峰，这是由于含有酪
相对含量/% 10.73 25.43 14.83 16.89 32.12
氨酸、苯丙氨酸等芳香族氨基酸 [30] 。
2.5 FTIR 分析 2.6 氨基酸分析
按照 1.7 节实验方法，对裸藻蛋白进行了 FTIR 根据 1.8 节实验方法采用全自动氨基酸分析仪
和二级结构测定，结果见图 13、14。 对裸藻蛋白进行了氨基酸组成测定，分析结果如表
6 所示。由表 6 可见，脯氨酸的含量最多，为 34.546 mg/g，
占比达到了 12.80%；必需氨基酸占比达到了35.28%，
疏水氨基酸占比达到了 50.80% [32] 。

表 6 裸藻蛋白的氨基酸分析
Table 6 Amino acid analysis of Euglena protein
氨基酸 含量/ 占比/% 氨基酸 含量/ 占比/%
名称 (mg/g) 名称 (mg/g)
天冬氨酸 20.245 7.50 酪氨酸 14.654 5.43
苏氨酸 * 14.662 5.43 苯丙氨酸 * 15.016 5.56
丝氨酸 12.490 4.63 组氨酸 * 9.190 3.41

图 13 裸藻蛋白的 FTIR 谱图 谷氨酸 28.644 10.61 赖氨酸 15.465 5.73
Fig. 13 FTIR spectrum of Euglena protein 甘氨酸 12.550 4.65 精氨酸 18.952 7.02
丙氨酸 16.556 6.13 脯氨酸 34.546 12.80
胱氨酸 0.576 0.21 亮氨酸 * 19.664 7.29
缬氨酸 * 12.430 4.61 必需氨基酸 95.218 35.28
蛋氨酸 * 9.588 3.55 疏水氨基酸 137.122 50.80
异亮氨酸 * 14.668 5.43 总氨基酸 269.896 100
*
注： 为必需氨基酸；疏水氨基酸包括脯氨酸、丙氨酸、缬
氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸。

3 结论

通过泡沫分离法提取裸藻蛋白，以回收率和富
图 14 裸藻蛋白的酰胺Ⅰ带的拟合谱图
Fig. 14 Fitting map of amide Ⅰ band of Euglena protein 集比为指标，确定了泡沫分离的最佳 pH、装液量、