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·470·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

            需的氨基酸      [5-7] ，同时含有皂苷、多酚类、黄酮类、                  100 mL，摇匀，制得 50 g/L 的香草醛-冰醋酸溶液，
            植物甾醇等生物活性成分，具有抗真菌、抗病毒、                             备用。
            抗癌、降胆固醇、降血糖、抗血栓、利尿、抗炎等                             1.2.2    齐墩果酸标准曲线的绘制         [15]
            多种功效     [8-10] ，被称为“粮食之母”，被定义为“21 世                   由于藜麦种皮皂苷主要为齐墩果酸型的三萜皂
            纪的粮食之一”       [11-12] 。                            苷，选择齐墩果酸作标准品，用香草醛-高氯酸比色
                 虽然藜麦引种已遍布全球，成为食品领域的研                          法进行皂苷浓度测定          [13,26] 。其反应原理为：皂苷在
            究热点，但中国对藜麦的研究仍处于育种、种植和                             强氧化性酸作用下发生脱氢，被氧化，与香草醛结
            初加工阶段，对藜麦营养价值、活性物质及其应用                             合，生成一种紫色络合物。准确称取齐墩果酸标准
            的研究较少      [13-15] 。藜麦种皮中含有丰富的皂苷，是                 品 25  mg，加少量乙醇溶解后，定容于 25  mL 容量
            天然皂苷的重要来源，质量分数为 0.14%~2.30%                [16] ，  瓶中，摇匀，制成 1 g/L 齐墩果酸标准溶液；用移
            占藜麦中皂苷含量的 68%          [17] 。提取皂苷的方法主要             液枪准确移取 10、20、30、40、50、60、70、80、
            为有机溶剂提取法、酸水解法、超临界流体二氧化                             90、100 μL 于 10 支 10 mL 试管中，70 ℃水浴下，
            碳法和超声提取法         [18-20] ，但单一的提取方法存在提              挥发除去溶剂；加入 50  g/L 香草醛-冰醋酸溶液
            取率低、提取时间长、样品回收率差等缺点                     [21-24] 。  0.2 mL、高氯酸 0.8 mL，摇匀；60 ℃水浴加热 15 min，
            生物酶可以水解蛋白质、纤维素、果胶等，具有操                             取出后立即用冰水浴冷却 5 min；加入 4 mL 乙酸乙
            作时间短、成本低、作用条件温和等优点，被逐渐                             酯，以不加标准品溶液的样品作空白，在 400~
            应用于天然产物的提取中。超声提取法(提取率                              800 nm 处进行紫外扫描，测得该样品在 550  nm 处
            73.07%)通过超声空化、机械作用和热效应来加速细                         有最大吸收。以标准物质量浓度和吸光度关系作线
            胞内活性物质的释放、扩散和溶解。为此，在超声                             性回归，得标准曲线方程为 A=0.04904ρ0.01141，
            提取前加入酶解工艺，以提高皂苷的提取率。但由                             R =0.9994。
                                                                2
            于酶特异性强，作用范围较小，细胞壁破除率不高，                            1.2.3    藜麦种皮的预处理
            皂苷的提取率（果胶酶 82.20%；纤维素酶 81.56%）                         将藜麦种皮样品过 80 目筛，在 50 ℃的烘箱中
            较低。考虑到藜麦种皮中含有大量的纤维素以及果                             干燥至恒重，备用。
            胶质等，因此，采用纤维素酶和果胶酶复合酶制剂，                            1.2.4    藜麦种皮的酶解以及皂苷的提取
            改变细胞壁的通透性，以提高皂苷的提取率                     [25] 。         准确称取 2 g 藜麦种皮粉于 250  mL 圆底烧瓶
                 本文以藜麦种皮为研究对象，采用复合酶辅助                          中，加入 30  mL 去离子水和酶制剂（总酶用量为
            超声波法提取皂苷，综合了生物酶法以及超声波提                             1.5%，以藜麦种皮粉质量为基准，下同）〔m（纤维
            取法的优点，并以对 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基                       素酶）∶m（果胶酶）=3∶2〕，调节体系 pH 为 5.0，
            （DPPH·）的清除率为指标，考察了藜麦皂苷的体外
                                                               电磁搅拌在 50 ℃下酶解 0.5 h；待酶解完成后，90 ℃
            抗氧化活性，实现了资源的再利用和可持续发展，为                                       [27-28]
                                                               下 30 s  灭酶     ；加入 70 mL 无水乙醇，超声提取
            藜麦种皮皂苷的进一步开发利用提供了理论依据。
                                                               20 min。将提取液减压过滤，滤渣重复提取 1 次
            1    实验部分                                          （50 mL 体积分数为 70%的乙醇溶液），合并滤液。
                                                               提取过程重复 5 次。采用分光光度法测定藜麦种皮
            1.1    材料、试剂与仪器                                    皂苷浓度，并按式（1）计算皂苷提取率。
                 藜麦种皮，青海三江沃土生态农业科技有限公                                                  m
                                                                            提取率   /%    1    100      （1）
            司（经青海省食品药品检定所姜世贤研究员鉴定）；                                                    m 0
            纤维素酶（50000 U/g）、果胶酶（100000 U/g），宁                  式中：m 1 为只提取 2 次的皂苷提取量，mg；m 0 为
            夏和氏璧生物技术有限公司；齐墩果酸标准品、                              总皂苷质量，mg，即根据响应面实验得出的最佳提
            DPPH，上海源叶生物科技有限公司；香草醛、冰醋                           取工艺进行多次提取，直至提取液中皂苷质量为 0，
            酸、高氯酸、乙醇和盐酸，AR，国药集团化学试剂                            并将其多次提取量进行加和所得。
            有限公司。                                              1.2.5    藜麦皂苷的抗氧化性实验
                 TU-1901  双光束紫外-可见分光光度计，北京普                        将样品母液分别稀释为 200、400、600、800、
            析通用仪器有限责任公司。                                       1000、1200、1400、1600、1800、2000 mg/L。采用文
            1.2    方法                                          献[29]的方法进行测定，并用式（2）计算清除率。
            1.2.1    香草醛-冰醋酸溶液的配制                                                     A  A 
                                                                        清除率    /%   1   1  2     100    （2）
                 准确称取 5 g 香草醛，用冰醋酸溶解并定容至                                                 A
                                                                                         0  
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