Page 150 - 《精细化工》2021年第1期

·140· 精细化工 FINE CHEMICALS
超声 10 min 后更换新的 NaOH 溶液。进行单因素实
验为：固定超声次数 3 次，改变 NaOH 溶液浓度为
0、0.05、0.1、0.5、1.0 mol/L；固定 NaOH 溶液浓
度为 0.5 mol/L，改变超声次数 2、3、4、6、8 次。
1.2.2.2 V(石油醚)∶V(乙醇)=1∶1/NaCl 溶液法
（1）加入溶剂 V(石油醚)∶V(乙醇)=1∶1 超声
萃取，每超声 10 min 后换新的溶剂。进行单因素实
验为：固定超声次数 3 次，改变料液比 1∶1、1∶2、
1∶3、1∶4、1∶5（g∶mL）；固定料液比为 1∶2
（g∶mL），改变超声次数 2、3、4、5、6 次。
（2）按溶剂 V(石油醚)∶V(乙醇)=1∶1，料液
比 1∶2（g∶mL），超声 3 次处理鸡脚糜。处理后的
鸡脚糜再加入 NaCl 溶液进一步超声处理，每超声
10 min 后换新的 NaCl 溶液。进行单因素实验为：
固定超声次数 3 次，改变 NaCl 的质量分数为 1%、
2%、3%、4%、6%；固定 NaCl 的质量分数为 6%，
改变超声次数为 1、2、3、4、5 次。
1.2.2.3 脂肪酶法
（1）鸡脚糜中加入脂肪酶溶液进行超声萃取，
脂肪酶溶液中脂肪酶的质量分数为 2%，超声时间为
30 min，考察脂肪酶溶液不调 pH 或加 NaOH 调至
pH 8（脂肪酶溶液中 NaOH 浓度为 0.05、0.10 mol/L）
的脱脂效果。
（2）固定脂肪酶溶液中 NaOH 浓度为 0.05 mol/L
和超声时间为 30 min，改变脂肪酶溶液中脂肪酶的
质量分数为 1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%。
（3）固定脂肪酶溶液中 NaOH 浓度为 0.05 mol/L
和脂肪酶的质量分数为 2.5%，改变超声时间 10、20、
30、40、50 min。
1.2.3 脱脂及除杂蛋白工艺
每次实验取 10 g 鸡脚糜，超声波功率为 350 W，
采用两步法处理。第一步：溶剂 V(石油醚)∶V(乙
醇)=1∶1 超声处理，每超声 10 min 后换新的溶剂；
第二步，将第一步处理后的鸡脚糜，加入质量分数为
2.5%的脂肪酶溶液（NaOH 浓度 0.05 mol/L，pH 8）
超声处理。按如下方案优化实验参数：
（1）第二步，料液比 1∶2（g∶mL），超声时
间 40 min，考察第一步：a. 固定超声次数为 3 次，
改变料液比 1∶2、1∶4、1∶5（g∶mL）；b. 固定
料液比为 1∶2（g∶mL），改变超声次数 3、4、5 次。
（2）第一步，料液比为 1∶2（g∶mL），超声
次数为 4 次，考察第二步：c. 固定超声时间为 40 min，
改变料液比 1∶2、1∶3、1∶4（g∶mL）；d. 固定
料液比为 1∶2（g∶mL），改变超声时间 40、50、
60 min。
（3）上述因素优化后对应的较佳条件记为
A~D。将 A~D 条件进行组合后得条件 E，采用条件
第 38 卷
E 进行实验，即：第一步料液比 1∶4（g∶mL），超
声 5 次，第二步料液比 1∶3（g∶mL），超声 60 min。
对以上经两步处理后的所有产品测脱脂率。对
A~E 条件下所得产品除测脱脂率外，还测氨基酸组
成，以评价胶原蛋白损失和除杂蛋白效果。每个因
素重复实验 3 次，结果取平均值。
1.2.4 热提法制备明胶
鸡脚糜采用 V(石油醚)∶V(乙醇)=1∶1/NaCl 溶
液法的较佳条件脱脂处理，然后参考文献 [2,12] ，以料
液比 1∶3（g∶mL）加去离子水，在 60 ℃下提取
12 h，冷却、得明胶，分析氨基酸组成。
1.3 鸡脚原料及处理后产物的分析
1.3.1 鸡脚水分、粗脂肪、粗蛋白测定
鸡脚中水分采用国标 GB/T 5009.3—2016 测定，
粗脂肪含量采用国标 GB/T 5009.6—2016 测定，粗
蛋白含量采用国标 GB/T 5009.5—2016 测定。
1.3.2 脱脂率
按 1.2.2 节方法测粗脂肪含量，然后计算脱脂率：
脱脂率/%=[(g 0 –g)/g 0 ]×100 （1）
式中：g 0 和 g 表示脱脂前、脱脂后的粗脂肪含量
（g/100 g）。
1.3.3 氨基酸组成分析
取处理前或处理后的鸡脚糜 0.20 g，加入 10 mL
6 mol/L HCl 溶液，110 ℃下水解 24 h，冷却、抽滤、
滤液旋蒸后，用超纯水定容至 1 mL，过 0.22 μm 滤
膜，待分析。
高效液相色谱分析条件：Poroshell HPH-C18 分
析柱（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）；柱温 40 ℃；流
速 1 mL/min；二极管阵列检测器（0~13 min，波长
338 nm；13~18 min，波长 262 nm）；流动相 A：5 mmol/L
n(Na 2 HPO 4 )∶n(Na 2 B 4 O 7 )=1∶1 缓冲盐溶液（pH
8.2）；流动相 B：V(甲醇)∶V(乙腈)∶V(水)=45∶45∶
10；梯度洗脱程序：0~0.35 min，体积分数 2% B；
0.35~13.4 min，体积分数 2%~57% B；13.4~13.5 min，
体积分数 57%~100% B；13.5~15.7 min，体积分数
100% B；15.7~15.8 min，体积分数 100%~2% B；
15.8~18.0 min，体积分数 2% B；通过自动进样程序
将 2.5 g/L 9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）和 10 g/L 邻
苯二甲醛（OPA）溶液加入到样品里进行柱前氨基
酸衍生，进样 1 μL。每个样品平行测定 3 份。
外标法定量分析：18 种氨基酸混合标准品，用
蒸馏水逐级稀释，配制浓度为 0.0625、0.125、0.25、
0.5、1.0 mmol/L 的标准溶液，以浓度为横坐标（x），
峰面积为纵坐标（y），绘制 18 种氨基酸的标准曲线，
将所测样品中各氨基酸峰面积带入标准曲线中，计
算氨基酸含量。最终结果表示成各氨基酸在原始鸡