Page 151 - 《精细化工》2022年第7期

第 7 期 徐德忠，等: 热响应全氟聚醚丙烯酸酯共聚物的制备及载药性能 ·1437·

丙酮中。随后，将 10 mL 去离子水以 10 μL/s 滴入 0.5 mL 芘的甲醇溶液置于相应数量的 10 mL 试样瓶
到快速搅拌的 P(PFPHM 9 -b-DMAA-b-PEGMA 360 )的 中，放置 24 h 以挥发甲醇，往含芘的试样瓶中加入
丙酮溶液中。最后，将聚合物溶液转移至截留相对 10 mL 不同质量浓度（ρ，g/L）的聚合物溶液超声
分子质量为 3500 的透析袋中，透析 24 h。在初始的 1 h 并避光平衡 24 h 后进行荧光光谱测试。芘在样
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6 h 内，每隔 2 h 彻底更换去离子水，随后间隔 6 h 品溶液中的浓度为 6×10 mol/L。测试参数设置为：
彻底更换去离子水。最后，将透析所得的样品用真 发射波长为 373 nm，在 300~350 nm 内扫描混合
空冷冻干燥箱在–78 ℃冷冻干燥 72 h，即得空白 溶液。
胶束。 1.7 空白/载药胶束的激光共聚焦显微镜测试
载药胶束的制备：称取 3 mg DOX/HCl 溶解于 将 10 μL 质量浓度为 1 g/L 的空白/载药胶束丙
1 mL 丙酮中，10 mg P(PFPHM 9-b-DMAA-b-PEGMA 360) 酮溶液滴在载玻片中央，将盖玻片的一端先接触滴
溶解于 4 mL 丙酮中，将两者混合 150 r/min 搅拌 液，随后缓慢放下，后在激光共聚焦显微镜下观察，
60 min，将 10 mL 去离子水以 10 μL/s 滴入快速搅拌 使用 LAS AF Lite 软件处理数据。
的 P(PFPHM 9 -b-DMAA-b-PEGMA 360 )、DOX/HCl 丙 1.8 生物毒性测试
酮溶液中。最后，将聚合物溶液按照上述步骤进行 采用 MTT 比色法测定空白胶束的生物毒性。使
透析 24 h，且在透析过程中全程避光。将透析所得 用 DMEM 在 37 ℃、体积分数 5%的 CO 2 饱和湿度
的样品用真空冷冻干燥箱在–78 ℃冷冻干燥 72 h
培养箱中培养 HepG2 细胞。在 96 孔板中，每孔 180 μL
后，得到载药胶束 12.598 mg。
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接种 5×10 个细胞，分别与 0.016、0.08、0.4、2 和
1.3 结构表征
10 μg/mL 的 DOX/HCl、负载 DOX/HCl 的胶束
NMR：以 CDCl 3 为 PPFPHM 9 -Br 的溶剂，在 〔 P(PFPHM 9 -b-DMAA-b-PEGMA 360)-DOX/HCl 〕和
250 MHz 和 25 ℃下测定样品 19 FNMR 谱图；以
P(PFPHM 9-b-DMAA-b-PEGMA 360 )于 37 ℃培养细胞
CDCl 3 为 HEMA 和 PFPHM 的溶剂，以 DMSO-d 6
48 h 后加入 20 μL MTT 溶液（质量浓度 5.0 g/L）培养
为 P(PFPHM 9 -b-DMAA)-Br 的溶剂，以氘代丙酮为
4 h 后移除所有溶液，每孔加入 150 μL DMSO 溶解
PPFPHM 9 -Br 和 P(PFPHM 9 -b-DMAA-b-PEGMA 360 ) 形成的甲臜晶体，置于恒温水浴摇床中振荡（37 ℃，
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的溶剂，在 250 MHz 和 25 ℃下测定样品 HNMR
100 r/min）10 min 后测定 490 nm 处的吸光度值，按
谱图。FTIR：采用 KBr 压片法，波数范围 4000~
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400 cm ，分辨率设置为 4 cm ，扫描 32 次。 下式计算细胞生长抑制率：
OD - OD
空白/载药聚合物胶束的粒径测试：采用 WANG 细胞生长抑制率 /%= 对照 实验  100 （1）
等 [14] 测试方法，在 25 ℃测试 15 d 内稀释 10 倍后的 OD 对照
空白/载药胶束的粒经及其分布，对每个样品进行 3 式中：OD 对照为 HepG2 细胞培养后 490 nm 下的吸光度
次重复测试，求得平均粒径，分散性指数（PDI）由 值；OD 实验为 HepG2 细胞分别与 DOX/HCl、P(PFPHM 9 -
Zetasizer 软件计算。 b-DMAA-b-PEGMA 360 )-DOX/HCl 和 P(PFPHM 9 -b-
1.4 空白胶束的血清稳定性测试 DMAA-b-PEGMA 360 )培养后 490 nm 处的吸光度值。
分别将 3.0 mL 胎牛血清和 2.0 mL 去离子水混 1.9 载药及释药性能测试
合，后加入 5.0 mL 质量浓度为 1.0 g/L 的聚合物胶 载药量及包封率按下式计算：
束溶液中，形成体积分数为 30%的胎牛血清溶液， 载药量 /%  m 1  100 （2）
用激光粒度仪测量 7 d 内胶束的粒径。 m 2
1.5 LCST 测试 包封率 / %  m 1  100 （3）
使用 UV-Vis 测试胶束的 LCST，配制质量浓度 m 3
为 1.0 g/L 的 P(PFPHM 9 -b-DMAA-b-PEGMA 360 )水溶 式中：m 1 为聚合物胶束内装载药物的质量，mg；
液，在 510 nm 下测试 20~50 ℃时溶液的透光率。 m 2 为载药胶束质量，mg；m 3 为投入药物质量，mg。
1.6 CMC 测试 对制备的载药胶束进行称重后溶解于 10 mL 无
以 芘作为 探针 测定聚 合物 的 CMC 值。 将 水乙醇，转移至截留相对分子质量为 3500 的透析袋
P(PFPHM 9 -b-DMAA-b-PEGMA 360 ) 配成 0.50~1×10 –4 中，置于 200 mL pH=6.5 的磷酸盐缓冲溶液中，参
g/L。称取 24 mg 芘溶于 100 mL 甲醇配成 1.2 mmol/L 考 XU 等 [15] 的研究分别在 37 和 42 ℃下进行透析，
芘的甲醇溶液，待用。移取 1 mL 芘的甲醇溶液，加 在 1、2、4、8、12、24、48 和 72 h 分别取样 3 mL，
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入 99 mL 甲醇稀释至 1.2×10 mol/L，密封保存。取 并补充 3 mL 新鲜介质且全程注意避光。配制质量浓